目前
，無血清培養基的研究有兩個方向：一是培養基中不含有任何動物來源的添加組分；二是培養基中不含有不明確的添加組分。依此可以將當前應用較多的無血清培養基歸納為以下四種：

 

（1)無血清培養基，為一般意義上無血清培養基
，用各類可替代血清功能的生物材料配製細胞培養基，如牛血清白蛋白(BSA) 、轉鐵蛋白、胰島素等生物大分子物質，以及從血清中提取的去除蛋白質的混合脂類以及水解蛋白等。其特點是培養基中的蛋白含量較高,添加物質的化學成分不明確，其中含有大量的動物來源蛋白。

 

(2)無wu動dong物wu來lai源yuan培pei養yang基ji

，許xu多duo商shang業ye公gong司si開kai發fa的de無wu動dong物wu來lai源yuan培pei養yang基ji是shi基ji於yu生sheng產chan重zhong組zu藥yao物wu的de安an全quan考kao慮lv，培pei養yang基ji中zhong的de添tian加jia組zu分fen無wu動dong物wu來lai源yuan
，需xu要yao的de蛋dan白bai來lai源yuan於yu重zhong組zu蛋dan白bai或huo者zhe蛋dan白bai水shui解jie物wu，這zhe些xie組zu分fen可ke以yi保bao障zhang細xi胞bao生sheng長chang及ji增zeng殖zhi的de需xu要yao。

 

(3)wudongwudanbaipeiyangji，peiyangjiwanquanbuyongdongwulaiyuandedanbai，danrengyoubufentianjiawushilaiyuanyuzhiwudanbaideshuijiepianduanhuohechengduotaipianduandengqitayanshengwu。cileipeiyangjizufenxiangduiwending，danbixutianjialeiguchunjisuhezhileiqianti，bingqieduipeiyangdexibaoshigaoduteyixingde。

 

(4)化學組分限定培養基，此類培養基是目前最安全、最為理想的培養基，首先可以保證培養基批次間的一致性，其中所添加的少量動物來源的蛋白水解物
、蛋白都是成分明確的組份。其特點是培養基的性質明確，有利於進行細胞培養的代謝研究，同時分離純化也比較方便。

 

無血清培養基種類：

 

一、CHO：

 

      CHO細胞是中國倉鼠卵巢細胞(Chinese Hamster Ovary
，CHO)
，1957年美國科羅拉多大學Dr. Theodore T. Puck從一成年雌性倉鼠卵巢分離獲得
，為上皮貼壁型細胞

，是目前生物工程上廣泛使用的細胞係。工業生產上應用較多的是CHO-K1細胞，為轉化細胞係，細胞染色體分布頻率是2n＝22

，係亞二倍體細胞。ATCC保存CHO-K1細胞株
，編號為CCL-61，被廣泛地用於重組DNA蛋白的表達。由於該細胞存在遺傳缺陷，無脯氨酸合成基因，不能將穀氨酸轉變為穀氨酸-γ-半醛，培養過程中需在培養基中添加L-脯氨酸才能生長。並且由於該細胞已經霍亂毒素適應，形態學有所改變。最初細胞為貼壁型細胞，經多次傳代篩選後，也可懸浮生長。

 

      目前已有多種外源基因如人組織性纖溶酶原激活劑（tPA）
、人促紅細胞生成素（EPO）、乙肝表麵抗原（HBsAg）、幹擾素γ（IFNγ）
、幹擾素β（IFNβ）、白細胞介素2（IL2）
、凝血因子Ⅷ等在CHO細胞中得到表達。在美國已注冊的大約73 種蛋白藥物生產中
，應用哺乳動物細胞培養的有35 種
，CHO 細胞培養的就占27 種
，其中包括10種單克隆抗體。

 

二、BHK：

 

      BHK21細胞是幼年敘利亞地鼠腎細胞（Baby Hamster Syrian Kidney ）。1961 年3 月
，I.A.Macpherson 和 M.G.P. Stoker 從一日齡敘利亞地鼠腎分離建株
，經過84 天連續培養，獲得單細胞克隆細胞，即clone 13 或C13。BHK21 xibaoguangfanyongyuzengzhigezhongbingdu，yichengweizhibeikoutiyiyimiaosuoxubingdukangyuandelixiangxibaopeiyangxi，yingyongyukoutiyiyimiaoshengchan
，zhiwaihaikeyongyushengchankuangquanyimiaodengqitashouyongyimiao。BHK21 細胞染色體分布頻率是n＝44，為異雙倍體細胞係，4倍體發生率為4％，大多數細胞核型分析為44
，XY

，-6，-15，6q+
，15q+。原始的BHK21 細胞株為成纖維細胞，屬於貼壁依賴性細胞，後經無數次傳代後細胞可懸浮生長。美國ATCC保存BHK21細胞株
，編號為CCL-10，為C13 克隆株。對於BHK21細胞， ATCC 推薦使用的培養方式為：使用含10％胎牛血清的MEM 培養基進行細胞培養
，細胞培養溫度為37.0°C
，細胞培養後使用0.25％胰酶和0.03％EDTA消化細胞，細胞分種比例為1：2－1：10，每周1－2 次細胞傳代。主要用於口蹄疫疫苗生產。

 

三、Vero：

 

Vero細胞是成年非洲綠猴腎細胞（Adult African Green Monkey Kidney ）。上皮細胞
，貼壁依賴性生長。該細胞是日本千葉大學的Y. Yasumura和Y. Kawakita於1962年3月27日從一隻正常的成年非洲綠猴腎組織培養出來的。其可增值多種病毒，如脊髓灰質炎
、狂犬病毒、yinaobingdudeng，shengchanyimiao
，beipizhunyongyurenti。yekezuoweizhuanrandexiuzhuxibao，yongyubiaodawaiyuanjiyindedanbaizhiyaowuhebingdudejiance。zaifeidianqijianyouweiyanjiuguanzhuangbingduzuochugongxian

，zaiyiyaoyanjiuzhongguangfanyingyong。meiguoATCC保存Vero細胞株，編號為CCL-81。對於Vero細胞， ATCC推薦使用的培養方式為：使用含10％胎牛血清的MEM培養基進行細胞培養
，細胞培養溫度為37.0°C，細胞培養後使用用 0.25% (w/v) 的胰酶和0.53 mM EDTA消化細胞，推薦的細胞分種比例為1：4
，傳代期間，每周更換培養液2～3次。

 

      Vero細胞可使用方瓶或轉瓶進行細胞培養
，對於生物製藥企業，多使用15L轉瓶進行細胞培養。轉瓶生產製備Vero細胞的主要問題在於如何避免汙染

，以及細胞良好生長與傳代。與原代細胞以及二倍體細胞比較，Vero細胞更容易控製與培養，由於Vero細胞生長速度較快，可進行大比例分種培養。營養Vero細胞轉瓶培養效果的因素較多
，比如細胞消化液的選擇
、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)操(cao)作(zuo)程(cheng)序(xu)的(de)使(shi)用(yong)，但(dan)作(zuo)為(wei)重(zhong)要(yao)的(de)生(sheng)物(wu)製(zhi)藥(yao)原(yuan)材(cai)料(liao)，細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)基(ji)對(dui)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)效(xiao)果(guo)的(de)重(zhong)要(yao)性(xing)得(de)尤(you)為(wei)突(tu)出(chu)。細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)基(ji)不(bu)僅(jin)為(wei)細(xi)胞(bao)的(de)生(sheng)長(chang)提(ti)供(gong)必(bi)要(yao)的(de)各(ge)種(zhong)營(ying)養(yang)成(cheng)分(fen)，還(hai)為(wei)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)提(ti)供(gong)適(shi)宜(yi)的(de)環(huan)境(jing)，而(er)且(qie)，在(zai)利(li)用(yong)細(xi)胞(bao)進(jin)行(xing)生(sheng)物(wu)製(zhi)藥(yao)時(shi)
，培(pei)養(yang)基(ji)的(de)成(cheng)分(fen)可(ke)直(zhi)接(jie)影(ying)響(xiang)製(zhi)藥(yao)產(chan)品(pin)的(de)質(zhi)量(liang)。Vero細胞可使用多種細胞培養基進行培養，使用的血清含量通常為10%。Vero 細胞經較低濃度的血清適應傳代後，可適應低血清濃度而良好的生長，細胞的生長狀態和生長速度沒有明顯影響。

 

四、MDCK

 

      MDCK細胞係(MDCK Cell Lines)由Madin和Darby於1958年從美國Cocker Spaniel母曲架犬的腎髒組織分離培育建立，通常是以貼壁方式生長的上皮樣細胞。犬腎上皮連續細胞係MDCK (Madin-Daby canine kidney cells) 廣泛用於多種病毒的擴增和純化，如：呼腸孤病毒(Reovius)、腺病毒(Adenovirus)、犬細小病毒(Canine parvovirus，CPV)
、貓粒細胞缺乏症病毒(Feline panleukopenia virus，FPLV)及禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)等。由於其病毒感染效率高、增殖快，且不易變異，MDCK細胞係(MDCK Cell Lines)被公認為最適於甲
、乙型流感病毒疫苗生產的3種細胞係之一。傳統的MDCK細胞培養大多采用有血清貼壁培養方式。血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種複雜混合物
，其含有細胞生長所需的生長因子、激素
、載體蛋白、貼壁因子
、微量元素 以及其他營養物質，可以有效地促進細胞生長和產物表達。然而，血清的應用也存在許多問題：易受病毒、支原體或其他病原體的汙染
；批間差異造成產品批 次間的質量難以嚴格控製；大量血清蛋白的存在增加了下遊分離純化的難度
，部分蛋白難以通過分離純化手段徹底去除，影響了產品的最終質量；此外，血清 來源困難、價格昂貴，大規模動物細胞培養過程中使用血清將會大大增加生產成本。