實驗原理:細胞中的DNA受1NHC1,60℃水解作用以後,核酸中的嘌呤堿很快完全被除掉,使脫氧核糖中潛在的醛基獲得自由狀態。水解後,組織要經水洗再移至希夫(Schiff)試劑 中,希夫試劑 即同露出來的醛基發生反應,呈現紫紅色。這個反應是Feulgen在1942年提出來的,是DNA的一個特異性檢查法。
shuijiedeshijianhenzhongyao,yinweihesuandeshuijieyoulianggeguocheng,diyi,piaolingjianhenkuaibeichudiao,tuoyanghetangzhongqianzaidequanjixianluchulai,dier,zudanbaihehesuanyulaiyuduodibeichudiao。zaiduanshijiandeshuijiezuoyongyihou,diyigeguochengzhanyoushi,zheshihouyongxifushijiranse,ransetideransezuoyongzuiqiang。suizheshuijiezuoyongdejixujinxing,diergeguochengzhujianbianchengyoushi,yincishuijieyezhongdexifufanyingzengqiang,erransetizhongdexifuyingjianruo。zuihou,diergeguochengchaoguodiyiguochengshi,ransetiyesuizhitingzhifanying。
希夫試劑是堿性品紅———亞硫酸溶液,呈無色。與DNA醛基反應後,使堿性品紅恢複原來的紅色。
二、實驗目的:觀察蠶豆根尖細胞或其它根尖細胞內染色體中的DNA,以及染色體在有絲分裂中的行為,掌握Feulgen染色方法。
三、實驗材料:上次實驗製成了石蠟切片。
四、實驗準備:
1.用具 立式染色缸一套,鑷子,蓋玻片,小漏鬥,鐵架,毛邊紙,玻璃棒,顯微鏡,恒溫水浴 鍋,溫度計,燒杯,棕色瓶,黑紙。
2.玻璃器皿的清洗 主zhu要yao是shi染ran色se缸gang的de清qing洗xi,一yi般ban用yong肥fei皂zao粉fen洗xi,用yong水shui衝chong淨jing即ji可ke,如ru不bu能neng洗xi淨jing時shi,要yao用yong洗xi液ye浸jin泡pao後hou,再zai衝chong洗xi,自zi來lai水shui洗xi後hou,再zai用yong少shao量liang蒸zheng餾liu水shui過guo洗xi一yi次ci。盛sheng放fang100%酒精、二甲苯的染色缸必須幹燥,缸蓋內緣必須塗以幾士林,以防止蒸發和收水分,影響濃度。染色缸上要貼上標簽。
3.實驗所需藥口及配製
濃鹽酸(36—38%),堿性品紅,偏重亞硫酸鈉(Na2 S2 O5 );
亞硫酸鈉(Na2 SO3 ),固綠(fast green),加拿大中性樹膠乙醇(30—100%),二甲苯。
藥品配製:
1各種濃度的乙醇配製.
21NHCI配製:取濃HCI 82.5毫升加蒸餾水至1000毫升,搖勻。
3Sciff 試劑的配製
0.5克堿性品紅,加到已經煮沸的100毫升蒸餾水中,再煮沸3—4分鍾,待溶液冷卻到50℃時過濾,再等溶液冷到25℃以下時,加入10毫升的1NHCI和1。5克偏重亞硫酸鈉,裝在棕色瓶中,塞緊瓶子,用黑紙包好,放在暗處,第二天觀察,溶液還是淡紅色就不能用,隻得重配。
偏重亞硫酸鈉與1NHCI反應,放出SO2 ,SO2 與堿性品紅反應,生成堿性品紅--亞硫酸溶液,呈無色。
4漂染液的配製
先配10%的亞硫酸鈉溶液。
把10%亞硫酸鈉溶液10毫升加200毫升蒸餾水,再加10毫升1NHCI,即成漂當液。
5固綠染色液
0.5克固綠溶於100毫升95%乙醇溶液。
五、實驗步驟:
2.水解 先在恒溫水浴 箱中準備好恒溫60℃的1NHCI。zhuyiyidingyaokongzhihaowendubunengguogao,gaolequanjiyaopohuai,dilexiaojiebuchongfen,quanjibunengshifangchulai。shuijiedeshijianchangduanyaogenjucailiao,yijigudingyedezhongleierding。genjushiyanjieguo,quyigeshidangshijian。
因加拿大樹膠溶於二甲苯,所以片子一定要經二甲苯透明後才進行封片,操作方法如下:
1.用鑷子從二甲苯中取出載玻片,以毛邊紙吸幹餘液。
2.左zuo手shou開kai啟qi樹shu膠jiao瓶ping,右you手shou用yong瓶ping中zhong玻bo璃li棒bang蘸zhan取qu樹shu膠jiao滴di於yu載zai玻bo片pian上shang,並bing隨sui即ji蓋gai好hao瓶ping蓋gai。樹shu膠jiao的de用yong量liang視shi蓋gai玻bo片pian大da小xiao而er定ding。要yao使shi樹shu膠jiao在zai蓋gai玻bo片pian下xia滿man布bu,不bu發fa生sheng過guo多duo或huo不bu足zu。
3鑷nie取qu潔jie淨jing蓋gai玻bo片pian,以yi一yi邊bian澆jiao於yu載zai玻bo片pian上shang,然ran後hou徐xu徐xu放fang下xia,使shi樹shu膠jiao布bu滿man蓋gai玻bo片pian與yu載zai玻bo片pian之zhi間jian。產chan生sheng氣qi泡pao的de原yuan因yin是shi覆fu蓋gai太tai快kuai樹shu膠jiao用yong量liang不bu足zu,或huo樹shu膠jiao過guo稠chou。氣qi泡pao侵qin入ru後hou,妨fang礙ai鏡jing檢jian,且qie使shi標biao本ben褪tui色se。如ru有you氣qi泡pao產chan生sheng,則ze可ke以yi在zai靠kao近jin氣qi泡pao的de一yi邊bian再zai滴di樹shu膠jiao一yi滴di,然ran後hou輕qing壓ya蓋gai玻bo片pian,使shi氣qi泡pao逸yi出chu。
片子封片後,放在切片木框上,讓其自然幹燥,即可保存。
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