第一章 植物製片的方法及準備
植物製片技術是植物顯微技術課的一個重要組成部分,在有關植物形態建成、植物雜交育種、作物病蟲害防治、藥yao用yong植zhi物wu的de培pei育yu和he鑒jian別bie以yi及ji林lin木mu材cai性xing鑒jian定ding等deng多duo方fang麵mian的de研yan究jiu和he教jiao學xue工gong作zuo中zhong,都dou需xu要yao應ying用yong顯xian微wei製zhi片pian技ji術shu,由you於yu各ge種zhong作zuo物wu器qi官guan的de性xing質zhi差cha異yi以yi及ji研yan究jiu目mu的de的de不bu同tong,就jiu需xu要yao不bu同tong的de製zhi片pian方fang法fa,但dan因yin限xian於yu學xue時shi及ji篇pian幅fu,本ben書shu僅jin根gen據ju常chang用yong的de基ji本ben原yuan理li及ji教jiao學xue中zhong行xing之zhi有you效xiao的de方fang法fa加jia以yi介jie紹shao。
第一節植物製片的基本要求與主要製片方法
植物內部結構不能用大而厚的組織塊置於顯微鏡下觀察,必須進行製作切片,才能供顯微鏡下觀察應用。
石蠟(或徒手)切片,是將植物切成薄的材料,按下列主要步驟與要求製成永存切片。
1.采樣:材料的選擇與分割
2.殺生、固定與器皿清洗
3.衝洗(有的不經此步)
4.脫水(各級酒精)
5.透明
6.滲透(例如浸蠟)
7.包埋(石蠟包埋)
8.切片(切片機或徒手切片)
9.粘片
10.烘片
11.脫包埋劑(石蠟)
12.經各級酒精(脫水)
13.染色
14.分色
15.脫水
16.透明
17.封藏成永存片
從上述主要環節來看,首先將材料加以處理(1、2、3項),第二步進行製片基礎的處理工作(4、5、6、7項),在保證質量完成這兩類工作基礎上,方可順利完成切片工作(包括8、9、10項),也就是說切出符合規格的薄片來,然後再對組織進行染色、脫水、透明等一係列工作,才可製成透明清晰、染色鮮豔、適合顯微鏡觀察攝影,並作教學、科研長期保存的永存片。其詳細製片過程與方法,在以後章節內加以介紹。
通常製片分兩大類型。
第二節 溶液的配製
(一)各級酒精濃度的配製 在植物製片中常用各級酒精,一般以95%酒精來配製,為節約起見,避免用無水酒精來配製各級酒精(表1一2)。
在實驗中使用酒精量較大,每次以量筒量液花費時間多,可在500ml細口瓶有玻璃塞的瓶上貼一條寬1cm與yu瓶ping等deng長chang的de白bai色se紙zhi條tiao,僅jin在zai第di一yi次ci用yong量liang筒tong量liang酒jiu精jing與yu蒸zheng館guan水shui的de用yong量liang處chu劃hua上shang刻ke度du,以yi後hou每mei當dang瓶ping內nei溶rong液ye用yong完wan,即ji以yi紙zhi條tiao上shang刻ke度du分fen別bie倒dao入ru酒jiu精jing和he蒸zheng館guan水shui的de各ge用yong量liang即ji可ke。
(二)低濃度溶液配製 製片中染色液絕大多數為此類溶液。如1%番紅水溶液,即為番紅1g溶於l00mL的蒸餾水中;又如0.5%曙紅(伊紅)酒精溶液為0.5g曙紅溶於l00mL的95%酒精中。
其他如重量百分比濃度、摩爾濃度、克當量濃度等溶液的配製,在附錄5中介紹。
第二章 石蠟法製片原理與方法
第一節 材料的選擇與分割
材料的選擇和切割是根據研究目的而決定的,應注意以下諸條件。
1.應選取新鮮、無病蟲害並具代表性的材料。
2.先作徒手切片或剝離檢查,決定適宜的材料立即固定處理。
3.注意按季節及植物生長發育的不同階段而選取材料。
4.材料大小要適當,如根的直徑在5mm以內的,可切取5-10mm長的小段,直徑在5mm以上者可縱分割成1/2或1/4,橫切厚度約3-5mm;若以滑走切片機切片,長度約在2-3.5cm。
葉的切取切成2-5mm,若葉較寬可切10mm的長條,葉麵切取的部位,以研究者的目的靈活選取。切取材料必須使用新刀片,刀口和葉麵垂直迅速切割下來。
花、果的切割:花(hua)藥(yao)和(he)雄(xiong)蕊(rui)切(qie)割(ge),花(hua)芽(ya)和(he)幼(you)穗(sui)的(de)切(qie)割(ge),須(xu)剝(bo)去(qu)外(wai)部(bu)鱗(lin)片(pian)及(ji)葉(ye)鞘(qiao)和(he)其(qi)他(ta)部(bu)分(fen),切(qie)去(qu)多(duo)餘(yu)部(bu)分(fen)再(zai)入(ru)固(gu)定(ding)液(ye),有(you)的(de)花(hua)序(xu)則(ze)需(xu)去(qu)掉(diao)外(wai)方(fang)苞(bao)片(pian),一(yi)般(ban)小(xiao)的(de)花(hua)不(bu)經(jing)切(qie)割(ge)可(ke)投(tou)入(ru)固(gu)定(ding)液(ye),大(da)花(hua)果(guo)才(cai)進(jin)行(xing)分(fen)割(ge)處(chu)理(li)。
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