溶rong血xue空kong斑ban形xing成cheng試shi驗yan的de基ji本ben原yuan理li是shi將jiang經jing綿mian羊yang紅hong細xi胞bao免mian疫yi小xiao鼠shu的de脾pi細xi胞bao與yu一yi定ding量liang的de綿mian羊yang紅hong細xi胞bao混hun合he
，在zai補bu體ti參can與yu下xia，使shi抗kang體ti形xing成cheng細xi胞bao周zhou圍wei那na些xie受shou到dao抗kang體ti分fen子zi致zhi敏min的de綿mian羊yang紅hong細xi胞bao溶rong解jie，形xing成cheng肉rou眼yan可ke見jian的de溶rong血xue空kong斑ban。根gen據ju所suo操cao作zuo的de方fang法fa不bu同tong可ke分fen為wei直zhi接jie溶rong血xue空kong斑ban試shi驗yan，間jian接jie溶rong血xue空kong斑ban試shi驗yan，瓊qiong脂zhi固gu相xiang法fa，小xiao室shi液ye相xiang法fa，單dan細xi胞bao層ceng法fa等deng等deng。下xia麵mian介jie紹shao直zhi接jie溶rong血xue空kong斑ban形xing成cheng試shi驗yan。

　　二、操作步驟：

　　1. 底層瓊脂平皿的製備：將1.4％瓊脂加熱融化後傾注於平皿內，每個平皿6ml，凝固後置濕盒37℃備用。

2. 0.7％瓊脂加熱融化後加入華氏管內，每管2ml，47～49℃水浴保溫備用。

　　3. 免疫小鼠脾細胞懸液製備：用4×10３ 個綿羊紅細胞(SRBC)鹽水懸液腹腔免疫小鼠，對照為等量生理鹽水。4天後
，小鼠拉脫頸椎處死

，取出脾髒，用RPMI164。洗一次後置平皿中不鏽鋼篩網上,用注射器針芯研磨成懸液,洗滌兩次,調整細胞數為3～8×10６/ml。台盼蘭染色查活細胞數應大於90％。置4℃冰箱備用。

　　4. 試驗平皿的製備：依次將預溫40℃左右的25％SRBC、牼-SRBC吸收的滅活胎牛血清以及保存於4℃的脾細胞懸液各0.1ml加入預熱47～49℃的含0.7％瓊脂的華氏管中

，迅速混勻，立即傾注於鋪有底層瓊脂的平皿內，凝固後，置37℃孵育1小時。

5. 加入1∶5～1∶10稀釋的新鮮豚鼠血清0.5～1.0ml
，使其均勻覆蓋表麵,再次置37℃溫育30分鍾，即可用肉眼或借助於放大鏡進行空斑計數。

　　三
、試劑和器材 免疫學實驗技術論壇  http://bbs.bbioo.com/forum-140-1.html

　　㈠ 試劑

　　1. 1.4％瓊脂：用pH7.4PBS配製。

　　2. 0.7％瓊脂：用pH7.4PBS配製

3. 25％SRBC鹽水懸液

4. RPMI1640

5. 胎牛血清，56℃30分鍾滅活，並經SRBC吸收

　　6. 補體：新鮮豚鼠血清，用前經SRBC吸收後，用RPMI1640稀釋。

　　㈡ 器材：玻璃平皿7×1.5cm，三角燒瓶，水浴箱(47～49℃)，華氏管
，1ml注射器

，不鏽鋼篩網，青黴素瓶
，離心管

，不同規格加樣器等。

四、注意事項：

　　1. 0.7％瓊脂必須置47～49℃水浴融態保溫。如溫度過高會導致SRBC溶血或所加入脾細胞的死亡。溫度過低則在操作過程中瓊脂發生凝固
，影響上層瓊脂平板的製備

2. 離體的脾細胞應置4℃冰箱保存
，防止抗體分泌和細胞死亡。

　　3. 在製備試驗平皿時，對於所有玻璃器皿和各種試劑 
，均需預溫
，牭1各種試劑加入華氏管後，應與0.7％瓊脂 迅速充分混勻，然後立即傾倒於底層瓊脂 上，並避免傾入氣泡。

　　4. 加入的補體應均勻覆蓋於表層瓊脂上。

　　5. 製備底層平皿和試驗平皿時
，均須將平皿置於水平台上
，以保證瓊脂麵鋪平。