基礎培養基

絕大多數培養基是建立在平衡鹽溶液(BSS)基礎上，添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營養物質。最廣泛應用的培養基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13種必須氨基酸
、8種維生素。而Ham`s F12 也包括非必須氨基酸
，維生素的範圍亦很廣
，另外常規含有無機鹽和代謝添加劑（例如核苷酸）。MEM/F12 這兩種培養基各取1/2，形成神經生物學最通用的培養基。Dulbecco`s改良培養基――DMEM，現應用於快速生長的細胞，同MEM含有相同的營養成分
，但濃度高出2~4倍(bei)。選(xuan)擇(ze)某(mou)種(zhong)培(pei)養(yang)基(ji)，應(ying)仔(zai)細(xi)了(le)解(jie)成(cheng)分(fen)表(biao)，應(ying)知(zhi)道(dao)大(da)多(duo)數(shu)情(qing)形(xing)下(xia)培(pei)養(yang)基(ji)都(dou)有(you)不(bu)足(zu)。例(li)如(ru)，有(you)些(xie)培(pei)養(yang)基(ji)在(zai)氨(an)基(ji)酸(suan)中(zhong)包(bao)括(kuo)有(you)穀(gu)氨(an)酸(suan)，而(er)這(zhe)種(zhong)培(pei)養(yang)基(ji)雖(sui)廣(guang)泛(fan)用(yong)於(yu)神(shen)經(jing)生(sheng)物(wu)學(xue)領(ling)域(yu)，但(dan)它(ta)對(dui)某(mou)些(xie)對(dui)穀(gu)氨(an)酸(suan)敏(min)感(gan)的(de)可(ke)能(neng)有(you)細(xi)胞(bao)外(wai)毒(du)性(xing)損(sun)傷(shang)的(de)神(shen)經(jing)元(yuan)而(er)言(yan)，則(ze)並(bing)非(fei)最(zui)佳(jia)選(xuan)擇(ze)，特(te)別(bie)是(shi)如(ru)果(guo)神(shen)經(jing)元(yuan)生(sheng)長(chang)在(zai)缺(que)乏(fa)膠(jiao)質(zhi)的(de)環(huan)境(jing)中(zhong)時(shi)。F12中含有硫酸亞鐵
，據報道也有神經毒效應。
在zai所suo有you這zhe些xie培pei養yang基ji中zhong，穀gu氨an酸suan比bi其qi他ta氨an基ji酸suan有you更geng高gao的de濃nong度du，這zhe是shi因yin為wei它ta具ju有you不bu穩wen定ding性xing以yi及ji在zai許xu多duo細xi胞bao培pei養yang中zhong它ta常chang用yong作zuo碳tan源yuan。對dui於yu神shen經jing元yuan的de培pei養yang常chang常chang在zai基ji礎chu培pei養yang基ji中zhong增zeng加jia葡pu萄tao糖tang的de含han量liang到dao0.6%或者加入丙酮酸（若培養基中這兩種物質缺乏時）。MEM與F12均要用5%的CO2來平衡，DMEM含更高濃度的NaCO3，要用10%的CO2來平衡，當然也可以在較低CO2濃nong度du下xia使shi用yong。這zhe些xie基ji礎chu培pei養yang基ji的de組zu成cheng成cheng分fen是shi建jian立li在zai對dui不bu同tong細xi胞bao係xi生sheng長chang的de研yan究jiu之zhi上shang的de，但dan通tong常chang在zai原yuan代dai培pei養yang中zhong使shi用yong也ye能neng有you比bi較jiao令ling人ren滿man意yi的de結jie果guo。
原則上，HEPES作為緩衝劑可用來代替碳酸氫鹽，以解除需要高濃度CO2培養環境的限製。實際操作中並非如此簡單。顯然，溶解的CO2與碳酸氫鹽對良好的細胞生長是重要的。Leiboviz`s L15培養基可用來在大氣環境中令神經細胞生長，該培養基采用了與眾不同的BSS作基礎，它含有高濃度的氨基酸來提高緩衝能力
，培養基中使用半乳糖作碳源，以阻止培養基中乳酸形成
，少量溶解的CO2由丙酮酸代謝產生。這一培養基的優點是明顯的，特別是在保持較高CO2有困難時，例如在長時間的顯微操作及生理學研究中。L15培養基已用來成功的培養了外周神經元
，但尚未在CNS神經元的發育研究中全麵檢測過。

血清

細(xi)胞(bao)在(zai)單(dan)純(chun)的(de)基(ji)礎(chu)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)不(bu)能(neng)存(cun)活(huo)

，在(zai)特(te)殊(shu)類(lei)型(xing)的(de)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)中(zhong)必(bi)須(xu)提(ti)供(gong)某(mou)些(xie)痕(hen)量(liang)營(ying)養(yang)物(wu)質(zhi)及(ji)生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)才(cai)能(neng)使(shi)細(xi)胞(bao)得(de)以(yi)生(sheng)長(chang)並(bing)維(wei)持(chi)生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)。基(ji)礎(chu)培(pei)養(yang)基(ji)常(chang)常(chang)要(yao)添(tian)加(jia)血(xue)清(qing)，血(xue)清(qing)終(zhong)濃(nong)度(du)多(duo)為(wei)5~20%。特te殊shu用yong途tu的de血xue清qing來lai源yuan須xu用yong經jing驗yan確que定ding
，廣guang泛fan應ying用yong的de血xue清qing種zhong類lei有you馬ma血xue清qing與yu胎tai牛niu血xue清qing。胎tai牛niu血xue清qing中zhong富fu含han有you絲si分fen裂lie因yin子zi，常chang選xuan其qi作zuo增zeng殖zhi細xi胞bao用yong的de血xue清qing，也ye用yong於yu細xi胞bao係xi和he原yuan代dai培pei養yang。而er馬ma血xue清qing常chang常chang用yong來lai作zuo有you絲si分fen裂lie後hou的de神shen經jing元yuan培pei養yang。然ran而er，很hen多duo人ren也ye將jiang胎tai牛niu血xue清qing用yong於yu神shen經jing元yuan培pei養yang，也ye有you人ren用yong馬ma血xue清qing來lai培pei養yang膠jiao質zhi細xi胞bao。用yong大da鼠shu進jin行xing神shen經jing元yuan培pei養yang的de某mou些xie研yan究jiu者zhe喜xi歡huan使shi用yong同tong型xing血xue清qing；人類的胎盤血清
，亦曾用於神經組織的器官類型的培養，也用在一些特殊培養種類中。
xueqingdebutongpihaohanyoubutongdechengfen，suoyixuduorenfaxian，yinggaizaishiyongqianduixueqingjinxingceshi。daduoshushijishangtigongyangpin，suomanyidepihaojikexuanyong
，zheyangkeyiyicidedaozugouyinianyongliangdexueqing，xueqingzaishiyongqiantongchangzai56℃加熱30分鍾
，這一過程稱為滅活。

無血清培養基

1979nianshenjingxibaopeiyangchuxianleyigezhongyaojinzhan
，yonghuaxuetianjiajijikeweichishenjingxibaocunhuoyushengchangerbuxuyaozaipeiyangjizhongtianjiaxueqing。qigongzuojichushiyongheshidejisu
、營養物和促貼壁的物質的組合置換培養基中的成分
，最後找到了適合大多數細胞培養的試劑配方，該配方稱為N2，專門用於神經細胞培養，最早是用在B104大鼠神經母細胞瘤細胞係的培養。它的基礎培養基是1：1的DMEM與H12的混合液
，添加了胰島素、轉鐵蛋白

、黃體酮
、fuanhexi。yidaosuheyidaosuyangshengchangyinziduiyudaduoshuleixingxibaodecunhuoheshengchangyouzhongyaozuoyong
，xishiguguanggantaichanshengdehezuoyinzi，kenengyouzhuyuguoyanghuawuhechaoyanghuawudeshuijie
，youbaodaoshuohainengfangzhixibaodeguangzhaosunshang。suihoudeqitapeifangruN1N3則含有較低濃度的轉鐵蛋白。
weiliaodaodeshishangshupeifanggouchengdepeiyangjikeyizhichishenjingmuxibaoliuxibaoxikuaisuzengzhi，suihouyoufazhanlenengzhichiyuandaipeiyangdegezhongshenjingyuanshengchangdepeiyangji，zhezhongpeiyangjizaixuduoshiyanshiliyiqudaileyouxueqingpeiyang。zaimouxiepeiyangfanganzhong，xibaozhijiejinruwuxueqingpeiyang，zheyangdepeiyangjikeyixiaochulaizixueqingdebujunyixing。gengweizhongyaodeshi
，tamenkeyonglaijianceshengchangyinziyijiqitacujinshenjingyuancunhuohuoshengchangdeyinzi
，huozheyonglaijiancenaxiekebaohushenjingyuanmianzaohuanjingduwusunshangdezhiji。zhuanyongyushenjingyuandepeiyangjizaimouxiepeiyanghuanjingzhonghaikeyijiandifeishenjingyuanxibaodezengzhi，gukeshishenjingyuanchunhua。
血(xue)清(qing)中(zhong)含(han)有(you)的(de)組(zu)分(fen)，例(li)如(ru)血(xue)清(qing)蛋(dan)白(bai)
，可(ke)作(zuo)為(wei)代(dai)謝(xie)毒(du)物(wu)清(qing)除(chu)劑(ji)使(shi)用(yong)並(bing)能(neng)聚(ju)集(ji)於(yu)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)。當(dang)缺(que)乏(fa)這(zhe)些(xie)成(cheng)分(fen)時(shi)，如(ru)神(shen)經(jing)元(yuan)在(zai)無(wu)血(xue)清(qing)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)生(sheng)長(chang)時(shi)，特(te)別(bie)容(rong)易(yi)為(wei)過(guo)氧(yang)化(hua)物(wu)及(ji)自(zi)由(you)基(ji)傷(shang)害(hai)
，這(zhe)已(yi)被(bei)許(xu)多(duo)研(yan)究(jiu)者(zhe)注(zhu)意(yi)到(dao)了(le)。過(guo)氧(yang)化(hua)物(wu)酶(mei)以(yi)及(ji)超(chao)氧(yang)化(hua)物(wu)歧(qi)化(hua)酶(mei)可(ke)阻(zu)止(zhi)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)過(guo)氧(yang)化(hua)物(wu)和(he)超(chao)氧(yang)化(hua)物(wu)的(de)累(lei)積(ji)，有(you)報(bao)道(dao)講(jiang)可(ke)以(yi)促(cu)進(jin)低(di)密(mi)度(du)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)的(de)存(cun)活(huo)。有(you)學(xue)者(zhe)發(fa)現(xian)細(xi)胞(bao)存(cun)活(huo)可(ke)為(wei)氧(yang)分(fen)壓(ya)的(de)下(xia)降(jiang)而(er)促(cu)進(jin)。因(yin)而(er)，無(wu)血(xue)清(qing)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)配(pei)方(fang)常(chang)含(han)有(you)抗(kang)氧(yang)化(hua)劑(ji)的(de)試(shi)劑(ji)。例(li)如(ru)
，維(wei)生(sheng)素(su)E和he丙bing酮tong酸suan
，可ke作zuo為wei過guo氧yang化hua物wu清qing除chu劑ji使shi用yong。上shang述shu這zhe些xie影ying響xiang在zai高gao密mi度du培pei養yang時shi變bian小xiao，特te別bie是shi神shen經jing元yuan與yu膠jiao質zhi共gong培pei養yang時shi，它ta們men可ke以yi吸xi收shou和he代dai謝xie神shen經jing元yuan毒du性xing物wu質zhi如ru穀gu氨an酸suan。
yinggaizhuyi
，jinguanwuxueqingpeiyangjishiyouhuaxuexiandingxingde
，danzaipeiyangguochengzhongtarengyoubiandong，peiyangqishishikenengyouxiewuzhiquefa，erhouxibaodechanwukenengjilei，congershipeiyangjidechengfengaibian。zheqishishiyoulingyifangmiandehaochu，jitiaojianpeiyangji（已培養過細胞的培養基）的形成


，條件培養基常常用來增加神經元和膠質細胞的發育。
生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)絕(jue)大(da)多(duo)數(shu)哺(bu)乳(ru)類(lei)胚(pei)胎(tai)神(shen)經(jing)元(yuan)有(you)嚴(yan)格(ge)的(de)營(ying)養(yang)要(yao)求(qiu)，若(ruo)不(bu)能(neng)提(ti)供(gong)適(shi)宜(yi)的(de)生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)或(huo)合(he)適(shi)的(de)因(yin)子(zi)組(zu)分(fen)，將(jiang)會(hui)使(shi)絕(jue)大(da)多(duo)數(shu)神(shen)經(jing)元(yuan)在(zai)體(ti)外(wai)培(pei)養(yang)的(de)數(shu)天(tian)中(zhong)死(si)亡(wang)。解(jie)決(jue)這(zhe)一(yi)問(wen)題(ti)有(you)兩(liang)條(tiao)思(si)路(lu)

，一(yi)是(shi)讓(rang)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)提(ti)供(gong)自(zi)己(ji)的(de)營(ying)養(yang)因(yin)子(zi)
，二(er)是(shi)在(zai)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)加(jia)入(ru)純(chun)的(de)生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)。如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)混(hun)合(he)物(wu)能(neng)在(zai)高(gao)密(mi)度(du)時(shi)生(sheng)長(chang)，所(suo)需(xu)的(de)生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)便(bian)會(hui)積(ji)累(lei)到(dao)可(ke)觀(guan)的(de)數(shu)值(zhi)，尤(you)其(qi)當(dang)培(pei)養(yang)基(ji)很(hen)少(shao)變(bian)化(hua)時(shi)。若(ruo)某(mou)種(zhong)細(xi)胞(bao)混(hun)合(he)物(wu)生(sheng)長(chang)時(shi)有(you)很(hen)少(shao)的(de)營(ying)養(yang)需(xu)求(qiu)，可(ke)保(bao)持(chi)培(pei)養(yang)基(ji)在(zai)一(yi)段(duan)時(shi)間(jian)裏(li)不(bu)作(zuo)任(ren)何(he)變(bian)動(dong)

，以(yi)使(shi)營(ying)養(yang)（生長）因子積累，而最後促使所需要的細胞類型能夠生長。但是

，這種對營養（生長）因(yin)子(zi)自(zi)身(shen)倚(yi)賴(lai)性(xing)亦(yi)有(you)弊(bi)端(duan)，因(yin)為(wei)通(tong)常(chang)在(zai)混(hun)合(he)細(xi)胞(bao)群(qun)體(ti)中(zhong)細(xi)胞(bao)很(hen)難(nan)有(you)同(tong)比(bi)例(li)增(zeng)殖(zhi)，某(mou)些(xie)細(xi)胞(bao)會(hui)因(yin)生(sheng)長(chang)條(tiao)件(jian)的(de)貧(pin)乏(fa)而(er)受(shou)限(xian)製(zhi)。另(ling)外(wai)
，這(zhe)種(zhong)方(fang)法(fa)隻(zhi)能(neng)進(jin)行(xing)相(xiang)當(dang)高(gao)密(mi)度(du)的(de)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)。因(yin)為(wei)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)條(tiao)件(jian)在(zai)細(xi)胞(bao)的(de)較(jiao)低(di)密(mi)度(du)時(shi)變(bian)的(de)不(bu)夠(gou)有(you)效(xiao)。不(bu)過(guo)某(mou)些(xie)時(shi)候(hou)純(chun)化(hua)神(shen)經(jing)元(yuan)群(qun)體(ti)的(de)低(di)密(mi)度(du)培(pei)養(yang)可(ke)用(yong)條(tiao)件(jian)培(pei)養(yang)基(ji)（經過了高密度培養）進行，或在膠質上生長的神經元所用過的培養基來支持。
滿足神經元營養需求的第二條途徑是向培養基中加入生長因子。通常用於組培的通用適宜因子是神經生長因子NGF。不過，隻有少數對這種蛋白質有反應的細胞類型的細胞才能生長。
許多PNS類型的神經元在離體狀態時表現出簡單的營養需求
，隻需提供單一的營養因子就足以使其在低密度時增殖。例如
，大鼠交感神經元僅需NGF即能存活
，在其生存期間
，這些神經元可在嚴格局限條件下生長好幾個月（即在無血清培養基中
、或缺乏膠質細胞、或在化學限定基質上）。有證據表明NGF是活體中交感神經元存活的生理調節因子。然而，交感神經元也對來自膠質細胞的神經營養因子（GDNF）有反應，還有NT3
、LIF與CNTF也對其有作用。在不產生GDNF或NT3的動物中，交感神經元會有損傷。在離體與活體營養需求之間的差別或許可以用在不同環境中NGF含量和分布的不同來解釋，培養中的NGF彌散在整個環境中，而在活體內，大部分區域的含量是有限的。因此
，NGF的de重zhong要yao性xing在zai於yu其qi合he適shi的de濃nong度du。盡jin管guan在zai大da多duo數shu實shi驗yan中zhong已yi經jing習xi慣guan了le營ying養yang因yin子zi的de最zui大da效xiao應ying使shi用yong量liang
，其qi他ta營ying養yang因yin子zi的de協xie同tong效xiao應ying在zai亞ya優you劑ji量liang下xia更geng容rong易yi觀guan察cha到dao。此ci外wai
，高gao濃nong度du的de營ying養yang因yin子zi可ke使shi細xi胞bao更geng能neng抵di抗kang毒du劑ji以yi及ji其qi他ta壓ya力li。相xiang應ying的de
，低di濃nong度du的de營ying養yang因yin子zi可ke能neng用yong來lai檢jian查zha表biao現xian型xing

，例li如ru對dui自zi由you基ji或huo氨an基ji酸suan的de毒du性xing刺ci激ji劑ji量liang的de反fan應ying。有you許xu多duo其qi他ta的dePNSpeiyangxitongzhixudanyiyingyangyinzijiukeshiyoushiyongjiazhidexibaobaochizaiyidingbili，guangweirenzhideyouchujijiezhuangzizhushenjingjieshenjingyuanhedashubeigenshenjingjieganjiaoshenjingyuan。buguo，zhexiemoxingyeyoujuxianxing。liru，peiyangzhongdejiezhuangshenjingjiedeshenjingyuanjiaruCNTF時
，超過90%的神經元能存活一個很長時期

，但並未有跡象表明它屬於內源的靶細胞來源的營養因子，而是有爭論的相關分子，GPA，扮演了這一角色。大鼠背根神經節含有好幾種細胞群體，其中小細胞群、包括nocioceptive cell，對NGF有反應


，但其他神經元，例如大細胞群中的proprioception 卻對不同的神經營養因子有反應。因此

，在大多條件下培養物的生長並不能忠實反映親代群體的所有特性
，這一問題在CNS的細胞培養中特別突出，因為已有的經驗表明，沒有一種培養基能適合於所有類型及亞類的神經細胞的生長。
現有的證據已表明，CNS神經元的營養需求比PNS的de更geng複fu雜za。對dui脊ji髓sui運yun動dong神shen經jing元yuan與yu視shi網wang膜mo節jie細xi胞bao神shen經jing元yuan的de研yan究jiu表biao明ming
，這zhe些xie神shen經jing元yuan與yu外wai周zhou神shen經jing元yuan相xiang比bi能neng對dui更geng為wei廣guang泛fan的de營ying養yang因yin子zi起qi反fan應ying。例li如ru，至zhi少shao發fa現xian了le15種不同的分子可在離體條件下增加神經元的存活。而且，已觀察到運動神經元與視網膜對任何單獨的營養因子的存活反應，與PNSzhongsuoguanchadaodedianxingfanyingxiangbi，douyaoxiaodeduo。yinci，daduoshuyingxiangyundongshenjingyuanjishiwangmojiexibaodeyingyangyinzijinjinzhinengzhichishenjingyuandeyaqun，ershenjingyuandezuijiacunhuoyaoqiuzhuduoyinzidejiehe。zaishiwangmojiexibaodepeiyangzhong，yinzidezuijiazuhe（如BDNF、CNTF、IGF、bFGF）包括了來自不同生長因子家族的代表。這一結果的普遍性尚待進一步的證實
，但敲除單一的營養因子基因之後，沒有表現出對CNS大(da)多(duo)類(lei)群(qun)的(de)神(shen)經(jing)元(yuan)的(de)存(cun)活(huo)產(chan)生(sheng)太(tai)大(da)影(ying)響(xiang)，這(zhe)一(yi)觀(guan)察(cha)與(yu)上(shang)述(shu)的(de)事(shi)實(shi)是(shi)一(yi)致(zhi)的(de)。現(xian)已(yi)知(zhi)少(shao)突(tu)膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞(bao)的(de)長(chang)期(qi)存(cun)活(huo)也(ye)需(xu)要(yao)眾(zhong)多(duo)營(ying)養(yang)因(yin)子(zi)的(de)相(xiang)互(hu)作(zuo)用(yong)。

抗生素

在細胞培養中最常用的抗生素是青黴素（常用濃度是25~100ui/ml）與鏈黴素（25~100μg/ml）。這兩種抗生素常混合使用。在一些實驗室裏，它們常規加入所有的培養基中。慶大黴素（10~100μg/ml）通tong常chang有you廣guang譜pu抗kang菌jun效xiao應ying，並bing具ju有you溶rong液ye穩wen定ding性xing，故gu也ye被bei一yi些xie實shi驗yan室shi使shi用yong
，特te別bie是shi當dang有you低di水shui平ping的de汙wu染ran存cun在zai時shi更geng是shi這zhe樣yang。以yi上shang這zhe些xie試shi劑ji對dui黴mei菌jun與yu酵jiao母mu菌jun的de汙wu染ran均jun無wu效xiao。
jinguanhenduoshiyanshizaixibaoxidepeiyangjizhongchangguijiarukangshengsuzuojidaipeiyang，danrengjianyibuyaozaiyuandaipeiyangzhongjiarukangshengsu，qiliyouzhiyishihuodedexibaoshiwujunde，yuandaipeiyangshidexijunwuranhenshaofasheng。qici
，jinguanrenweikangshengsuduixibaodaixiedeyingxiangkehulve
，danzuihaobimianshiyongtamen，yimianxibaoshengchanghuanjingdebuwending。zuizhongyaodeshiyaoyishidaopeiyangzhongzhuyaowuranwudeleixing，tamentongchanganshilewentidelaiyuan。

抗有絲分裂劑

某些DNA合成抑製劑對分裂細胞有毒，但對沒有DNA合成的細胞僅有輕微影響。由於神經元通常缺乏DNA合he成cheng能neng力li，因yin此ci對dui抗kang有you絲si分fen裂lie劑ji沒mei有you多duo大da反fan應ying。這zhe樣yang的de試shi劑ji常chang常chang用yong於yu神shen經jing元yuan的de培pei養yang，以yi消xiao除chu或huo減jian少shao非fei神shen經jing元yuan群qun體ti。若ruo要yao殺sha死si所suo有you的de非fei神shen經jing元yuan細xi胞bao

，可ke以yi先xian加jia入ru血xue清qing或huo生sheng長chang因yin子zi來lai保bao證zheng有you高gao比bi例li的de非fei神shen經jing元yuan細xi胞bao進jin行xingDNA合he成cheng

，此ci時shi再zai加jia入ru抗kang有you絲si分fen裂lie劑ji。但dan是shi，某mou些xie細xi胞bao在zai它ta的de細xi胞bao周zhou期qi的de某mou些xie時shi相xiang時shi對dui抗kang有you絲si分fen裂lie劑ji是shi不bu敏min感gan的de。不bu過guo
，可ke以yi重zhong複fu的de將jiang抗kang有you絲si分fen裂lie劑ji使shi用yong於yu增zeng殖zhi的de細xi胞bao群qun體ti。在zaiCNS神經元的培養中抗有絲分裂劑常常在星形細胞形成單層後加入，此時，星形細胞由於接觸抑製而終止了DNA的合成（即細胞停止增殖）
，tamenbuhuiyinkangyousifenliejidejiaruersiwang。yuandaipeiyangzhongyongzhezhongfangfazuzhichengxianweixibaodeguoduzengzhishishifenbiyaode。youliangzhongkangyousifenliejichangyongyushenjingyuandepeiyang：Fluorodexyuridine，是胸苷合成酶抑製劑，一般使用濃度為～10μM。尿苷（10μM）也常使用，可阻止不分裂細胞的RNA合成。另外，阿糖胞苷也常被使用，其使用濃度為5～50μM。shiyongrenheyizhongkangyousifenlieji，doubixukaolvtadeshenjingyuanduxing，yinggaiquedingzuidixiaoyingdeshiyongnongdu。etangbaoganzaihendidenongduxia
，yehuiduimouxiezhongleideshenjingyuanyouduxing，keyizaochengtedingshenjingyuandesiwang。qitadekangyousifenliejishangweibiaoxianchuzhezhongduxing。

培養的保持

培養物是應該保持在孵箱中的。孵箱可以自動將O2與CO2混(hun)合(he)很(hen)快(kuai)達(da)到(dao)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)設(she)計(ji)要(yao)求(qiu)
，空(kong)氣(qi)中(zhong)的(de)氧(yang)濃(nong)度(du)比(bi)血(xue)液(ye)和(he)腦(nao)脊(ji)液(ye)中(zhong)要(yao)高(gao)得(de)多(duo)。對(dui)於(yu)某(mou)些(xie)細(xi)胞(bao)的(de)生(sheng)長(chang)，包(bao)括(kuo)神(shen)經(jing)原(yuan)
，應(ying)使(shi)氧(yang)含(han)量(liang)處(chu)在(zai)一(yi)個(ge)較(jiao)低(di)的(de)水(shui)平(ping)。可(ke)以(yi)用(yong)孵(fu)箱(xiang)達(da)到(dao)這(zhe)個(ge)標(biao)準(zhun)
，但(dan)這(zhe)樣(yang)的(de)孵(fu)箱(xiang)並(bing)未(wei)廣(guang)泛(fan)使(shi)用(yong)。
高(gao)濕(shi)度(du)可(ke)避(bi)免(mian)培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)蒸(zheng)發(fa)，保(bao)持(chi)孵(fu)箱(xiang)中(zhong)的(de)濕(shi)度(du)通(tong)常(chang)是(shi)在(zai)箱(xiang)底(di)部(bu)放(fang)上(shang)一(yi)大(da)盆(pen)水(shui)
，這(zhe)水(shui)應(ying)該(gai)經(jing)常(chang)換(huan)，乘(cheng)水(shui)容(rong)器(qi)應(ying)經(jing)常(chang)消(xiao)毒(du)以(yi)防(fang)黴(mei)菌(jun)生(sheng)長(chang)。若(ruo)孵(fu)箱(xiang)曾(zeng)被(bei)黴(mei)菌(jun)孢(bao)子(zi)嚴(yan)重(zhong)汙(wu)染(ran)過(guo)，那(na)麼(me)要(yao)想(xiang)完(wan)全(quan)去(qu)除(chu)汙(wu)染(ran)則(ze)會(hui)非(fei)常(chang)困(kun)難(nan)。當(dang)培(pei)養(yang)物(wu)必(bi)須(xu)要(yao)長(chang)期(qi)保(bao)持(chi)在(zai)孵(fu)箱(xiang)中(zhong)時(shi)
，應(ying)采(cai)用(yong)較(jiao)少(shao)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)瓶(ping)
、皿
，且將蓋子蓋緊以避免蒸發，或采用相應的按比例供空氣的孵箱。
溫度的精確調節應定期檢查，孵箱溫度常設置為37℃或較低溫度。細胞在低溫時可有較長時間的忍耐限度，但當溫度升至39℃時，幾小時內即死亡。
weichipeiyangwudezuijiafanganchangchanggaibian。lirupeiyangjiaozhixibaoshi
，yaojingchanghuanyeyishiqizengzhidadaozuida。erzaipeiyangmouxieshenjingyuanshi，zeyaoqiujinkenengshaodehuanye，shenjingyuanzailiangcihuanyezhijiandetiaojianxiachangdezuihao。danaopizhidepeiyangyaoqiuzaibuhuanyedeqingxingxiaweichiyigeyueyishang。lingyifangmian
，xianghaimashenjingyuannayangdexibao

，yilaiyutiaojianpeiyangji，ruohuanyetaipinfanxibaojiuhuishuaitui，cishi
，kecaiyong1/3或1/2換液的方式。