酶聯免疫吸附試驗(Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay， ELISA)在生物實驗技術中
，ELISA是一種非常常見的分析方法。其qi原yuan理li是shi抗kang原yuan或huo抗kang體ti的de固gu相xiang化hua及ji抗kang原yuan抗kang體ti的de酶mei標biao記ji。加jia入ru酶mei反fan應ying的de底di物wu後hou，底di物wu被bei酶mei催cui化hua成cheng為wei有you色se產chan物wu，產chan物wu的de量liang與yu標biao本ben中zhong受shou檢jian物wu質zhi的de量liang直zhi接jie相xiang關guan
，由you此ci進jin行xing定ding性xing或huo定ding量liang分fen析xi。該gai實shi驗yan因yin其qi靈ling敏min度du較jiao高gao
，特te異yi性xing較jiao好hao，操cao作zuo較jiao簡jian單dan，可ke大da批pi量liang操cao作zuo而er廣guang泛fan應ying用yong於yu多duo種zhong傳chuan染ran性xing疾ji病bing的de篩shai查zha工gong作zuo中zhong。而在進行ELISA實驗的過程中，有時會遇到一種被稱為“花板”的現象。

“花板”現象，顧名思義
，是指在進行ELISA實驗時，酶標板上的反應孔出現了不均勻的顏色分布
，使得孔內的顏色看起來像是“花”一樣。所謂“花板”，就是空白
、陰性
、陽性對照及室內質控孔結果正常，而標本孔的OD值卻偏高，弱陽性結果較多。這一現象的出現
，影響了實驗結果的準確性，往往是由於實驗過程中的某些操作不當或試劑的問題所導致的。對“花板”現象進行了分析和總結
，認為花板原因大多在樣品，解決辦法主要在洗滌，孵育和顯色過程也會導致。

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、花板原因大多在樣品

所謂“花板”，就是空白、陰陽性對照及室內質控孔結果正常，而標本孔的OD值卻偏高。之所以空白、對照及質控結果正常而標本孔異常

，是因為樣品本身的原因，大部分或全部標本孔的OD值偏高
，很可能是因為樣品中某些共有的物質非特異性的吸附於固相載體
，而在實驗的過程中未被除去。

1.1、 待測血清中混有紅細胞或纖維蛋白原 這兩種物質易沉澱或附著在聚乙烯孔內不易洗淨
，實驗表明在較高的離心轉速(3000 /min)和較長的離心時間(>10 min)zhixia，xueyebiaobenbeichongfendilixinfenlizhihou，shihongxibaohexianweidanbaichongfenchendian
，keyizaijiayangshibimianjiaruhongxibaohexianweidanbai，bimianzheliangzhongganraowuzhiduishiyanjieguodeyingxiang，jiukebimian“花板”情況。

1.2、 高IgG血症 在實際工作中

，筆者發現，檢測丙肝的實驗出現花板的情況較多
，原因之一是因為目前國內外的抗-HCV EIA試劑均采用間接酶聯免疫檢測原理
，間接法的一個重要影響因素是血清中所含的高濃度的非特異性IgG
，IgG對聚苯乙烯有較強的吸附力
，非特異性IgG可吸附到固相載體上或包被的抗原上造成假陽性。

2、解決辦法主要在洗滌

聚苯乙烯因其具有較強的吸附蛋白質的性能而被廣泛用於ELISAshiyandeguxiangzaiti，jubenyixidengsuliaoduidanbaizhidexifushipubianxingde，yincixuyaotongguoxidiqingchuzaifanyingguochengzhongfeiteyixingdixifuyuguxiangzaitideganraowuzhi。xidizai ELISA 過(guo)程(cheng)中(zhong)雖(sui)不(bu)是(shi)一(yi)個(ge)反(fan)應(ying)步(bu)驟(zhou)，但(dan)卻(que)決(jue)定(ding)著(zhe)實(shi)驗(yan)的(de)成(cheng)敗(bai)。上(shang)述(shu)提(ti)到(dao)的(de)血(xue)清(qing)中(zhong)存(cun)在(zai)紅(hong)細(xi)胞(bao)或(huo)纖(xian)維(wei)蛋(dan)白(bai)原(yuan)，可(ke)以(yi)在(zai)加(jia)樣(yang)前(qian)離(li)心(xin)時(shi)得(de)到(dao)控(kong)製(zhi)，同(tong)樣(yang)也(ye)可(ke)以(yi)通(tong)過(guo)適(shi)當(dang)增(zeng)加(jia)洗(xi)滌(di)次(ci)數(shu)和(he)浸(jin)泡(pao)時(shi)間(jian)減(jian)輕(qing)或(huo)避(bi)免(mian)對(dui)實(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)的(de)影(ying)響(xiang)，同(tong)樣(yang)
，對(dui)於(yu)血(xue)液(ye)存(cun)在(zai)的(de)非(fei)特(te)異(yi)性(xing)的(de)IgG,實驗者很難在加樣時將其去除，那麼解決的最佳時機就是洗滌過程。

ELISA在洗滌過程中需注意以下幾點：

(1)板要平整
，尤其是在用洗板機洗板的過程中，往往是3排一起洗，如果板不平
，就很可能造成洗液有殘留
，從而導致非特異性結合不能清除幹淨，對實驗結果造成幹擾。

(2)洗液溫度

，實驗表明，洗液溫度也會影響洗板的幹淨程度，尤其是冬天溫度過低時容易出現“花板”問題。因此，最好保持室溫在20℃-30℃。

(3)洗液要注滿孔

，孔壁洗滌不幹淨也易造成“花板”現象。

(4)洗液要新鮮配置
，洗液要臨用前新鮮配製，放置時間過長易產生絮狀物或混濁，造成賭孔或花板。

(5)洗板次數不夠或洗滌間隔時間過短也會造成由於洗板不淨而造成“花板”。

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、孵育時間過長也會造成“花板”

本實驗室曾有一段時間經常出現丙肝檢測“花板”現(xian)象(xiang)，究(jiu)其(qi)原(yuan)因(yin)是(shi)由(you)於(yu)樣(yang)本(ben)較(jiao)多(duo)，加(jia)樣(yang)後(hou)未(wei)及(ji)時(shi)放(fang)入(ru)孵(fu)育(yu)箱(xiang)，反(fan)應(ying)板(ban)在(zai)室(shi)溫(wen)呆(dai)的(de)時(shi)間(jian)過(guo)長(chang)

，即(ji)間(jian)接(jie)增(zeng)加(jia)了(le)孵(fu)育(yu)時(shi)間(jian)
，導(dao)致(zhi)孵(fu)育(yu)時(shi)間(jian)過(guo)長(chang)，蛋(dan)白(bai)質(zhi)非(fei)特(te)異(yi)性(xing)吸(xi)附(fu)於(yu)固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)。因(yin)此(ci)，應(ying)嚴(yan)格(ge)控(kong)製(zhi)加(jia)樣(yang)時(shi)間(jian)

，加(jia)樣(yang)後(hou)及(ji)時(shi)孵(fu)育(yu)


，標(biao)本(ben)較(jiao)多(duo)時(shi)可(ke)分(fen)批(pi)操(cao)作(zuo)。

此外


，有些廠家的試劑顯色液不穩定，使用前容易變藍，如在實驗前不仔細檢查，很容易導致“花板”現象的發生
，這也提醒實驗者應使用新鮮的顯色液，大程度的保證實驗的準確性。

綜上所述，將ELISA“花板”現象總結為：花hua板ban原yuan因yin大da多duo在zai樣yang品pin，解jie決jue辦ban法fa主zhu要yao在zai洗xi滌di
，孵fu育yu和he顯xian色se過guo程cheng也ye會hui導dao致zhi。既ji然ran原yuan因yin大da多duo在zai樣yang品pin，那na麼me在zai樣yang品pin交jiao接jie時shi應ying嚴yan格ge按an照zhao規gui定ding，無wu溶rong血xue，無wu凝ning血xue，足zu量liang，單dan個ge的de溶rong血xue樣yang品pin雖sui不bu致zhi造zao成cheng“花板”
，但血紅蛋白中的血紅素基團
，具有類過氧化物的活性
，在以辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)為標記酶的ELISA測定中
，易在孵育過程中吸附於固相
，從而與後麵加入的底物反應顯色
，從而造成假陽性。

洗滌是ELISA的關鍵步驟

，充分有效的洗滌也是避免“花板”的有利措施。同樣，嚴格按照試劑說明孵育，使用新鮮的顯色液也是有效避免“花板”的保障。以上措施可以有效減少“花板”次數，從而提高檢測的特異性和準確性，更好的發揮ELISA的方法學優勢。