準zhun備bei工gong作zuo對dui開kai展zhan細xi胞bao培pei養yang異yi常chang重zhong要yao，工gong作zuo量liang也ye較jiao大da，應ying給gei予yu足zu夠gou的de重zhong視shi，推tui備bei工gong作zuo中zhong某mou一yi環huan節jie的de疏shu忽hu可ke導dao致zhi實shi驗yan失shi敗bai或huo無wu法fa進jin行xing。準zhun備bei工gong作zuo的de內nei容rong包bao括kuo器qi皿min的de清qing洗xi、幹燥與消毒
，培養基與其他試劑的配製、分裝及滅菌，無菌室或超淨台的清潔與消毒，培養箱及其他儀器的檢查與調試。

2、取材

在無菌環境下從機體取出某種組織細胞（視實驗目的而定），經過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）後接入培養器血中，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的*培養稱為原代培養。

理論上講各種動物和人體內的所有組織都可以用於培養
，實際上幼體組織（尤其是胚胎組織）bichengniangetidezuzhirongyipeiyang
，fenhuachengdudidezuzhibifenhuagaoderongyipeiyang
，zhongliuzuzhibizhengchangzuzhirongyipeiyang。qucaihouyinglijichuli，jinkuaipeiyang，yingubunengmashangpeiyangshi，kejiangzuzhikuaiqiechenghuangdoubandadexiaokuai

，zhi4℃的(de)培(pei)養(yang)液(ye)中(zhong)保(bao)存(cun)。取(qu)組(zu)織(zhi)時(shi)應(ying)嚴(yan)格(ge)保(bao)持(chi)無(wu)菌(jun)
，同(tong)時(shi)也(ye)要(yao)避(bi)免(mian)接(jie)觸(chu)其(qi)他(ta)的(de)有(you)害(hai)物(wu)質(zhi)。取(qu)病(bing)理(li)組(zu)織(zhi)和(he)皮(pi)膚(fu)及(ji)消(xiao)化(hua)道(dao)上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)時(shi)容(rong)易(yi)帶(dai)菌(jun)，為(wei)減(jian)少(shao)汙(wu)染(ran)可(ke)用(yong)抗(kang)菌(jun)素(su)處(chu)理(li)。

3、培養

將jiang取qu得de的de組zu織zhi細xi胞bao接jie入ru培pei養yang瓶ping或huo培pei養yang板ban中zhong的de過guo程cheng稱cheng為wei培pei養yang。如ru係xi組zu織zhi塊kuai培pei養yang
，則ze直zhi接jie將jiang組zu織zhi塊kuai接jie入ru培pei養yang器qi皿min底di部bu
，幾ji個ge小xiao時shi後hou組zu織zhi塊kuai可ke貼tie牢lao在zai底di部bu，再zai加jia入ru培pei養yang基ji。如ru係xi細xi胞bao培pei養yang，一yi般ban應ying在zai接jie入ru培pei養yang器qi皿min之zhi前qian進jin行xing細xi胞bao計ji數shu
，按an要yao求qiu以yi一yi定ding的de量liang（以每毫升細胞數表示）接入培養器皿並直接加入培養基。細胞進入培養器皿後，立即放入培養箱中
，使細胞盡早進入生長狀態。

正在培養中的細胞應每隔一定時間觀察一次
，觀察的內容包括細胞是否生長良好，形態是否正常

，有無汙染，培養基的pH是否太酸或太堿（由酚紅指示劑指示），此外對培養溫度和CO₂濃度也要定時檢查。

原代培養一般有一段潛伏期（數小時到數十天不等），在(zai)潛(qian)伏(fu)期(qi)細(xi)胞(bao)一(yi)般(ban)不(bu)分(fen)裂(lie)，但(dan)可(ke)貼(tie)壁(bi)和(he)遊(you)走(zou)。過(guo)了(le)潛(qian)伏(fu)期(qi)後(hou)細(xi)胞(bao)進(jin)入(ru)旺(wang)盛(sheng)的(de)分(fen)裂(lie)生(sheng)長(chang)期(qi)。細(xi)胞(bao)長(chang)滿(man)瓶(ping)底(di)後(hou)要(yao)進(jin)行(xing)傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)
，將(jiang)一(yi)瓶(ping)中(zhong)的(de)細(xi)胞(bao)消(xiao)化(hua)懸(xuan)浮(fu)後(hou)分(fen)至(zhi)兩(liang)到(dao)三(san)瓶(ping)繼(ji)續(xu)培(pei)養(yang)。每(mei)傳(chuan)代(dai)一(yi)次(ci)稱(cheng)為(wei)“一代”。二倍體細胞一般隻能傳幾十代，而轉化細胞係或細胞株則可無限地傳代下去。轉化細胞可能具有惡性性質
，也可能僅有不死性（Immortality）而無惡性。

4、凍存及複蘇

為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度（-196℃），將細胞收集至凍存管中加入含保護劑（一般為二甲亞碸或甘油）的de培pei養yang基ji，以yi一yi定ding的de冷leng卻que速su度du凍dong存cun

，保bao存cun於yu液ye氮dan中zhong。在zai低di的de溫wen度du下xia
，細xi胞bao保bao存cun的de時shi間jian幾ji乎hu是shi無wu限xian的de。複fu蘇su一yi般ban采cai用yong快kuai融rong方fang法fa，即ji從cong液ye氮dan中zhong取qu出chu凍dong存cun管guan後hou，立li即ji放fang入ru37℃水中，使之在一分鍾內迅速融解。然後將細胞轉入培養器皿中進行培養。

凍存過程中保護劑的選用、細胞密度
、降溫速度及複蘇時溫度、融化速度等都對細胞活力有影響。

5
、常用儀器設備

無菌室、超淨工作台
、三重純水蒸餾器、抽氣泵
、壓力蒸氣消毒器、電熱恒溫培養箱、培養器具
、CO₂培養箱、恒溫水浴鍋、倒置顯微鏡

、離心機、無菌過濾器、洗刷裝置、細胞計數板和電子細胞技術儀等等。