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液相色譜儀於多數檢測人來說是很好上手的儀器，但是就算是用過幾年、經驗豐富的分析員也會習慣於一些錯誤的操作，導致挺貴的機器沒用幾次就壞了。
jianhuafenxiguochengguranzhongyao，danshiweileshengshijianerhulveleyixiebibukeshaodebuzhou，sunhuaileyiqijiudebuchangshile。zuofenxishiyanshinaxiecaozuobunengzuo？naxielanbunengtou！
流動相不過濾
因為塵埃或其它任何雜質微粒都會磨損柱塞、密封環、缸體和單向閥，因此應預先除去流動相中的任何固體微粒。流動相最好在玻璃容器內蒸餾，而常用的方法是濾過，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器。泵的入口都應連接砂濾棒（或片）。輸液泵的濾器應經常清洗或更換。
使用後不及時清洗泵
liudongxiangbuyinghanyourenhefushixingwuzhi，hanyouhuanchongyedeliudongxiangbuyingbaoliuzaibengnei，youqishizaitingbengguoyehuogengchangshijiandeqingkuangxia。ruguojianghanhuanchongyedeliudongxiangliuzaibengnei，youyuzhengfahuoxielou，shenzhizhishiyouyurongyedejingzhi，jiukenengxichuyandeweixijingti，zhexiejingtijiangheshangshugutiweiliyiyangsunhuaimifenghuanhezhusaideng。
因此，必須泵入純水將泵充分清洗後，再換成適合於色譜柱保存和有利於泵維護的溶劑（對於反相鍵合矽膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。
流動相走空
泵工作時要留心防止溶劑瓶內的流動相被用完，否則空泵運轉也會磨損柱塞、缸體或密封環，最終產生漏液。
沒有流動相流出，又無壓力指示怎麼辦？
可能是泵內有大量氣體，這時可打開泄壓閥，使泵在較大流量（如5ml/min）下運轉，將氣泡排盡，也可用一個50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個可能原因是密封環磨損，需更換。
壓力和流量不穩了？
原因可能是氣泡，需要排除；huozheshidanxiangfaneiyouyiwu，kexiexiadanxiangfa，jinrubingtongneichaoshengqingxi。youshikenengshishalvbangneiyouqipao，huobeiyandeweixijinglihuozishengdeweishengwubufendusai，zheshi，kexiexiashalvbangjinruliudongxiangneichaoshengchuqipao，huojiangshalvbangjinruxisuan（如4mol/L硝酸）內迅速除去微生物，或將鹽溶解，再立即清洗。
壓力為啥過高或過低？
可(ke)能(neng)是(shi)是(shi)管(guan)路(lu)被(bei)堵(du)塞(sai)，需(xu)要(yao)清(qing)除(chu)和(he)清(qing)洗(xi)。壓(ya)力(li)降(jiang)低(di)的(de)原(yuan)因(yin)則(ze)可(ke)能(neng)是(shi)管(guan)路(lu)有(you)泄(xie)漏(lou)。檢(jian)查(zha)堵(du)塞(sai)或(huo)泄(xie)漏(lou)時(shi)應(ying)逐(zhu)段(duan)進(jin)行(xing)。在(zai)進(jin)行(xing)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)時(shi)，由(you)於(yu)多(duo)種(zhong)溶(rong)劑(ji)混(hun)合(he)，而(er)且(qie)組(zu)成(cheng)不(bu)斷(duan)變(bian)化(hua)，因(yin)此(ci)帶(dai)來(lai)一(yi)些(xie)特(te)殊(shu)問(wen)題(ti)，必(bi)須(xu)充(chong)分(fen)重(zhong)視(shi)：
PS：（在(zai)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)中(zhong)對(dui)組(zu)分(fen)複(fu)雜(za)的(de)樣(yang)品(pin)采(cai)用(yong)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)的(de)方(fang)法(fa)。在(zai)同(tong)一(yi)個(ge)分(fen)析(xi)周(zhou)期(qi)中(zhong)，按(an)一(yi)定(ding)程(cheng)序(xu)不(bu)斷(duan)改(gai)變(bian)流(liu)動(dong)相(xiang)的(de)濃(nong)度(du)配(pei)比(bi)，稱(cheng)為(wei)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)。從(cong)而(er)可(ke)以(yi)使(shi)一(yi)個(ge)複(fu)雜(za)樣(yang)品(pin)中(zhong)的(de)性(xing)質(zhi)差(cha)異(yi)較(jiao)大(da)的(de)組(zu)分(fen)能(neng)按(an)各(ge)自(zi)適(shi)宜(yi)的(de)容(rong)量(liang)因(yin)子(zi)k達到良好的分離目的。梯度洗脫的優點：1.縮短分析周期；2.提高分離能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加靈敏度。但有時引起基線漂移。）
梯度洗脫的流動相選擇不當
要(yao)注(zhu)意(yi)溶(rong)劑(ji)的(de)互(hu)溶(rong)性(xing)，不(bu)相(xiang)混(hun)溶(rong)的(de)溶(rong)劑(ji)不(bu)能(neng)用(yong)作(zuo)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)。有(you)些(xie)溶(rong)劑(ji)在(zai)一(yi)定(ding)比(bi)例(li)內(nei)混(hun)溶(rong)，超(chao)出(chu)範(fan)圍(wei)後(hou)就(jiu)不(bu)互(hu)溶(rong)，使(shi)用(yong)時(shi)更(geng)要(yao)引(yin)起(qi)注(zhu)意(yi)。
當有機溶劑和緩衝液混合時，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時需特別小心。
忽略的空白梯度洗脫
梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)所(suo)用(yong)的(de)溶(rong)劑(ji)純(chun)度(du)要(yao)求(qiu)更(geng)高(gao)，以(yi)保(bao)證(zheng)良(liang)好(hao)的(de)重(zhong)現(xian)性(xing)。進(jin)行(xing)樣(yang)品(pin)分(fen)析(xi)前(qian)必(bi)須(xu)進(jin)行(xing)空(kong)白(bai)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)，以(yi)辨(bian)認(ren)溶(rong)劑(ji)雜(za)質(zhi)峰(feng)，因(yin)為(wei)弱(ruo)溶(rong)劑(ji)中(zhong)的(de)雜(za)質(zhi)富(fu)集(ji)在(zai)色(se)譜(pu)柱(zhu)頭(tou)後(hou)會(hui)被(bei)強(qiang)溶(rong)劑(ji)洗(xi)脫(tuo)下(xia)來(lai)。用(yong)於(yu)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)的(de)溶(rong)劑(ji)需(xu)徹(che)底(di)脫(tuo)氣(qi)，以(yi)防(fang)止(zhi)混(hun)合(he)時(shi)產(chan)生(sheng)氣(qi)泡(pao)。
忽略了溶劑混合所帶來的粘度變化
混(hun)合(he)溶(rong)劑(ji)的(de)粘(zhan)度(du)常(chang)隨(sui)組(zu)成(cheng)而(er)變(bian)化(hua)，因(yin)而(er)在(zai)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)時(shi)常(chang)出(chu)現(xian)壓(ya)力(li)的(de)變(bian)化(hua)。例(li)如(ru)甲(jia)醇(chun)和(he)水(shui)粘(zhan)度(du)都(dou)較(jiao)小(xiao)，當(dang)二(er)者(zhe)以(yi)相(xiang)近(jin)比(bi)例(li)混(hun)合(he)時(shi)粘(zhan)度(du)增(zeng)大(da)很(hen)多(duo)，此(ci)時(shi)的(de)柱(zhu)壓(ya)大(da)約(yue)是(shi)甲(jia)醇(chun)或(huo)水(shui)為(wei)流(liu)動(dong)相(xiang)時(shi)的(de)兩(liang)倍(bei)。因(yin)此(ci)要(yao)注(zhu)意(yi)防(fang)止(zhi)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)過(guo)程(cheng)中(zhong)壓(ya)力(li)超(chao)過(guo)輸(shu)液(ye)泵(beng)或(huo)色(se)譜(pu)柱(zhu)能(neng)承(cheng)受(shou)的(de)最(zui)大(da)壓(ya)力(li)。
關於六通閥的正確使用和維護
①樣品溶液進樣前必須用0.45μm濾膜過濾，以減少微粒對進樣閥的磨損。
②轉動閥芯時不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動相受阻，使泵內壓力劇增，甚至超過泵的最大壓力；再轉到進樣位時，過高的壓力將使柱頭損壞。
③為防止緩衝鹽和樣品殘留在進樣閥中，每次分析結束後應衝洗進樣閥。通常可用水衝洗，或先用能溶解樣品的溶劑衝洗，再用水衝洗。
關於色譜柱的使用和維護
色譜柱的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。
調節流速太快
避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會衝動柱內填料，因此在調節流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩（如前所述）。
反衝色譜柱
一般說來色譜柱不能反衝，隻有生產者指明該柱可以反衝時，才可以反衝除去留在柱頭的雜質。否則反衝會迅速降低柱效。
預柱和保護柱
選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以yi避bi免mian固gu定ding相xiang被bei破po壞huai。有you時shi可ke以yi在zai進jin樣yang器qi前qian麵mian連lian接jie一yi預yu柱zhu，分fen析xi柱zhu是shi鍵jian合he矽gui膠jiao時shi，預yu柱zhu為wei矽gui膠jiao，可ke使shi流liu動dong相xiang在zai進jin入ru分fen析xi柱zhu之zhi前qian預yu先xian被bei矽gui膠jiao“飽和”，避免分析柱中的矽膠基質被溶解。
bimianjiangjizhifuzadeyangpinyouqishishengwuyangpinzhijiezhuruzhunei，xuyaoduiyangpinjinxingyuchulihuozhezaijinyangqihesepuzhuzhijianlianjieyibaohuzhu。baohuzhuyibanshitianyouxiangsigudingxiangdeduanzhu。baohuzhukeyierqieyinggaijingchanggenghuan。
液相使用中四大關鍵因素
1.液相色譜儀本身
duiyuyiqibenshenyibanbuhuiyouwenti，tebieshigangmaihuilaidexinyiqi。duiyuyiqibenshenzuizhongyaodejiushiyiqidexiaoyan，gangmaihuilaideyiqiyibandoushiyoumaijiaxianduiyiqizuoxitongdequerengongzuo（包括IQ、PQ、OQ），querenshunlitongguohou，zaiqingguojiahuoshengjiyiqijiandingjudelaixiaoyan，jiandinghegehoujiukeyifangxinshiyongle，chucizhiwai，yixiezuodehaodegongsimeibannianhuiduiyiqijinxingyicideneibuxiaoyan，mudejiushiweilebaozhengyiqidezhengchangkeyunxingzhuangtai。
2.色譜條件
色譜條件一般包括流動相、色譜柱、檢測波長、流速及進樣量。
流動相就涉及到配製流動相所用到的水和試劑試液，水一般要求用超純水或其他水的電阻率不大於18.2兆歐級別，試劑試液要求用色譜級別的，原因為防止水和試劑試液中的雜質對色譜結果的幹擾。
色(se)譜(pu)柱(zhu)會(hui)因(yin)不(bu)同(tong)的(de)品(pin)種(zhong)而(er)有(you)不(bu)同(tong)的(de)要(yao)求(qiu)，但(dan)每(mei)根(gen)色(se)譜(pu)柱(zhu)都(dou)有(you)它(ta)的(de)清(qing)洗(xi)要(yao)求(qiu)，這(zhe)個(ge)在(zai)色(se)譜(pu)柱(zhu)說(shuo)明(ming)書(shu)上(shang)都(dou)可(ke)以(yi)找(zhao)到(dao)，一(yi)定(ding)要(yao)根(gen)據(ju)上(shang)麵(mian)的(de)要(yao)求(qiu)進(jin)行(xing)，否(fou)則(ze)會(hui)造(zao)成(cheng)色(se)譜(pu)柱(zhu)效(xiao)下(xia)降(jiang)和(he)色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)使(shi)用(yong)壽(shou)命(ming)縮(suo)短(duan)，檢(jian)測(ce)波(bo)長(chang)也(ye)會(hui)因(yin)品(pin)種(zhong)的(de)不(bu)同(tong)有(you)不(bu)同(tong)的(de)要(yao)求(qiu)，這(zhe)裏(li)需(xu)要(yao)指(zhi)出(chu)的(de)是(shi)要(yao)注(zhu)意(yi)觀(guan)察(cha)檢(jian)測(ce)器(qi)氘(dao)燈(deng)能(neng)量(liang)的(de)變(bian)化(hua)，比(bi)如(ru)基(ji)線(xian)波(bo)動(dong)大(da)，活(huo)性(xing)成(cheng)分(fen)的(de)響(xiang)應(ying)值(zhi)突(tu)然(ran)變(bian)小(xiao)等(deng)，都(dou)有(you)可(ke)能(neng)是(shi)氘(dao)燈(deng)的(de)能(neng)量(liang)不(bu)足(zu)所(suo)引(yin)起(qi)的(de)，氘(dao)燈(deng)一(yi)般(ban)建(jian)議(yi)使(shi)用(yong)800小時，但實際上使用時間不止，可根據實際情況更換。
流速也因品種的不同而不同，一般為1.0ml/min，流速是不可隨意改動的，特別是作為QC人ren員yuan，但dan是shi作zuo為wei研yan發fa人ren員yuan，有you時shi為wei了le摸mo索suo條tiao件jian或huo進jin行xing方fang法fa耐nai用yong性xing驗yan證zheng，會hui對dui流liu速su進jin行xing改gai變bian以yi評ping價jia方fang法fa的de適shi用yong性xing。對dui於yu進jin樣yang量liang因yin不bu同tong的de品pin種zhong也ye有you不bu同tong規gui定ding，進jin樣yang量liang這zhe塊kuai現xian在zai都dou使shi用yong自zi動dong進jin樣yang，所suo以yi進jin樣yang精jing密mi度du都dou很hen好hao，不bu需xu強qiang調tiao什shen麼me。
3.操作人員
shouxian，zuoweiyexiangcaozuorenyuan，yidingyaorenzhenxuexiyexiangdeshuomingshu，zhangwoyexiangyingjianheruanjiandecaozuo，zhangworichangdeweihubaoyang，zhangwozuijichuguzhangdepaichuheweixiu。
yibanyexiangdecaozuoguichengyeshiyoucaozuorenyuanqicaode，suoyizhiyaoyangeanzhaocaozuoyaoqiujinxingcaozuo，yibanbuhuichuxianwenti，dangran啫lixuyaotebiezhichudeshiduiyuyexiangderichangweihubaoyanghenzhongyao，biruliudongxiangdeguolv、脫氣、泵密封墊的清洗、係統管路的清洗、溶劑過濾頭的清洗等，倘若不堅持，很容易導致色譜柱堵塞、係統壓力過大、色譜峰異常等不必要的故障，浪費時間。
其次，操作人員在配製液相分析用樣品溶液時，最好由同一個人單獨完成，以免不必要的偶然誤差。
4.液相安裝環境
液相色譜儀應盡量安裝於水平、遠離振動、電(dian)磁(ci)幹(gan)擾(rao)的(de)屋(wu)內(nei)的(de)台(tai)麵(mian)上(shang)，有(you)條(tiao)件(jian)的(de)話(hua)盡(jin)量(liang)將(jiang)液(ye)相(xiang)數(shu)據(ju)處(chu)理(li)係(xi)統(tong)分(fen)隔(ge)開(kai)，一(yi)個(ge)是(shi)防(fang)止(zhi)色(se)譜(pu)基(ji)線(xian)噪(zao)音(yin)偏(pian)大(da)，基(ji)線(xian)不(bu)穩(wen)等(deng)，一(yi)個(ge)是(shi)為(wei)減(jian)少(shao)對(dui)人(ren)體(ti)的(de)危(wei)害(hai)。
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