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菌株是微生物實驗室檢驗工作中不可缺少的重要生物資源，常用於培養基驗收、試驗對照、人員培訓考核、方法確認等方麵的質量控製。因此為了確保工作菌株的生物特性和純度、shixiangongzuojunzhufangbiankuaijiedeshiyongjisuyuan，junzhongdexiangguanguanligongzuozaiweishengwushiyanshijiuxiandeyouweizhongyao，antongyicaozuochengxuzhibeidejunzhushiweishengwushiyanjieguoyizhixingdezhongyaobaozheng。jintianxiaobianjiu“微生物實驗室菌株管理及使用”主題和大家做一個交流分享。
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菌株管理及相關概念
標準菌株：即0代菌種，是指從官方菌種保藏機構獲得並至少定義到屬或種的水平的菌株。實驗室的標準菌株應有明確來源。
標準儲備菌株：從國內或國外菌種保藏機構獲得的標準菌株經過複活並在適宜的培養基中生長後，即為標準貯備菌株。
儲存菌株：儲存菌株通常從凍幹或超低溫保存的標準儲存菌株進行製備。
工作菌株：標準儲備菌株或儲存菌株經繼代培養後得到的菌株。工作菌株不可替代標準菌株。
標準培養物：標準菌株、標準儲備菌株、工作菌株的統稱。
商業派生菌株：即用型與標準菌株所有相關特性等效的可以溯源的商業衍生物。常見的有定量工作菌株。
藥品微生物檢驗用的試驗菌應為有明確來源的標準菌株，或使用與標準菌株所有相關特性等效的可以溯源的商業派生菌株。
標準菌株應來自認可的國內或國外菌種保藏機構。中國藥典2020版以及國標中涉及的菌株主要來自於兩大菌種保藏中心：中國醫學細菌保藏管理中心（CMCC）、美國標準菌種保藏中心（ATCC）。
菌jun株zhu購gou買mai前qian需xu根gen據ju實shi驗yan室shi檢jian測ce需xu求qiu製zhi定ding采cai購gou計ji劃hua，經jing審shen批pi後hou，向xiang認ren可ke的de國guo內nei或huo國guo外wai的de菌jun種zhong保bao藏zang機ji構gou購gou買mai標biao準zhun菌jun株zhu。標biao準zhun菌jun株zhu到dao達da實shi驗yan室shi後hou，菌jun種zhong管guan理li人ren應ying檢jian查zha其qi名ming稱cheng、數量以及每一支的完整性，同時將菌種的所有信息填寫記錄（包括菌種名稱、編號、數量、代數、來源、接收日期、接收人等），並將其貯存在規定溫度的冰箱裏。
標準菌株的複蘇、複壯或培養物的製備應按供應商提供的說明或按已驗證的方法進行。複蘇、複壯應選擇營養成分豐富且全麵的培養基（例如：TSA/TSB/NA/NB/SDB/SDA等），一般不使用選擇性較強的培養基；特殊的一些菌株在普通的培養基上生長不好，可能還需添加生長因子。
標準儲備菌株應進行純度和特性確認。純度確認包括：平板劃線查看菌落形態、革蘭氏染色、顯微鏡觀察菌體形態等；關鍵特性確認可選擇：特征生化反應確認、試劑盒鑒定、菌種鑒定儀鑒定等。需要注意的是，從開啟、複蘇、複壯到純度和特性的確認，都應做好實驗記錄。
標準儲備菌株保存時，可將培養物等份懸浮於抗冷凍的培養基中，並分裝於小瓶中，藥典建議采用低溫冷凍幹燥、液氮貯存、超低溫冷凍（低於-30℃）等方法保存。低於-70℃huodiwenlengdongganzaofangfakeyiyanchangjunzhongbaocunshijian。junzhongyingshezhuanrenguanli，junzhongbaozangdedidianyingcaiquyidingdecuoshishifeiguanlizhebunengqingyihuoqu，lirujiasuobaoguan，shuangrenbaoguandeng。
標準儲備菌株可用於製備每月或每周1次轉種的工作菌株。冷凍菌種一旦解凍轉種製備工作菌株後，不得重新冷凍和再次使用。
從保藏機構獲取的凍幹菌種為0代菌種，每轉接一次增加一代（1代是指將活的培養物接種到微生物生長的新鮮培養基中培養，任何形式的轉種均被認為傳代一次），工作菌株的傳代次數應嚴格控製，不得超過5代，以防止過度的傳代增加菌株變異的風險。
從標準菌株製備標準儲備儲備菌株流程（GB 4789.28-2013）
工作菌株由儲存菌株或標準貯備菌株製備，除此之外，還可以使用可以溯源的商業派生菌株。標準菌株如果經過確認試驗證明已經老化、退化、變異、汙染等或該菌株已無使用需要時，應及時滅菌銷毀。
製備工作菌株流程圖（GB 4789.28-2013）
菌種必須定期轉種傳代，並做純度、特性等實驗室所需關鍵指標的確認，實驗室應建立菌種管理（從標準菌株到工作菌株）的文件和記錄，內容包括菌株的申購、進出、收集、貯藏、確認、轉種、使用以及銷毀等全過程。每支菌種都應注明其名稱、標準號、接種日期、傳代數，並記錄菌種生長的培養基和培養條件、菌種保藏的位置和條件等信息。
有關微生物實驗室菌株管理及使用涉及的相關法規如下，可供參考:
中國藥典2020版《9203藥品微生物實驗室質量管理指導原則》
中國藥典2020版《9204微生物鑒定指導原則》
中國藥典2020版《9205藥品潔淨實驗室微生物監控和控製指導原則》
藥品生產質量管理規範（2010年修訂）
CNAS-CL03-A001-2019《能力驗證提供者認可準則在微生物領域的應用說明》
CNAS-CL05-2016《實驗室生物安全認可規則》
GB 4789.28-2013食品安全國家標準 食品微生物學檢驗培養基和試劑的質量要求
GB/T 27405-2008 《實驗室質量控製規範食品微生物檢測》
GB 4789.1-2016 食品安全國家標準食品微生物學檢驗 總則
SN/T 1538.1-2016 培養基製備指南 第1部分 實驗室培養基製備質量保證通則
SN/T 1538.2-2016 培養基製備指南 第2部分 培養基性能測試實用指南
SN/T 2660-2010 食品微生物實驗室菌種保藏方法
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商業派生菌株
商業派生菌株是標準菌株的商業衍生物，最常見的是定量工作菌株。在中國藥典2020版9203指導原則裏麵有提到“藥(yao)品(pin)微(wei)生(sheng)物(wu)檢(jian)驗(yan)用(yong)的(de)試(shi)驗(yan)菌(jun)應(ying)來(lai)自(zi)認(ren)可(ke)的(de)國(guo)內(nei)或(huo)國(guo)外(wai)菌(jun)種(zhong)保(bao)藏(zang)機(ji)構(gou)的(de)標(biao)準(zhun)菌(jun)株(zhu)，或(huo)使(shi)用(yong)與(yu)標(biao)準(zhun)菌(jun)株(zhu)所(suo)有(you)相(xiang)關(guan)特(te)性(xing)等(deng)效(xiao)的(de)可(ke)以(yi)溯(su)源(yuan)的(de)商(shang)業(ye)派(pai)生(sheng)菌(jun)株(zhu)”，USP<1117>也有關於可以使用合格的商品化菌株的描述“Cultures for use in compendial tests should be acquired from a national culture collection or a qualified secondary supplier”。隨著技術的進步與發展，微生物實驗室穩定、高效的需求，用於質控的商業化定量工作菌株的廣泛應用定是必然趨勢。
商業派生菌株要求相關特性與標準菌株等效，除此之外，還有關鍵一點就是“可以溯源”。微生物"溯源"通常包含兩層意思，一是指程序、途徑合法有序，來源和去向清晰可控；另外是技術層麵的佐證，比如株水平的鑒定識別等。這兩個層麵互為補充支撐，以保證菌種準確無誤、合法有效。
選擇使用商業派生菌株時，建議做好實驗室檢測結果與標準菌株的差異分析和風險評估。綜合評估之後，選擇合適的商業派生菌株。
