一. 實驗要求
1. 實驗前必須掌握與實驗相關的醫學微生物學、醫學寄生蟲學及醫學免疫學基礎理論。做好預習,明確實驗目的與實驗內容。
2. 對於設計性實驗,在老師的指導下,注意發揮自身潛能,勤於思考,靈活掌握所學知識。
3. 在實驗過程中做到三嚴:嚴肅、嚴格、嚴謹。如實記錄實驗結果,按規定完成實驗報告。對於失敗實驗結果要分析原因,必要時重複實驗。
4. 嚴格遵守實驗室規則。
二. 實驗室規則
1.進實驗室穿工作服,離開時脫下,反折。
2.除必需教材、文具外,其他物品禁止帶入實驗室。
3.按規定位置就坐。保持實驗室安靜,不得隨意走動、進出。
4.實驗室內禁止飲食、吸煙。謹防經口感染病原。
5.實驗操作應嚴格按實驗指導和教師的要求進行。
6.實驗過程中若不慎將傳染性標本汙染桌麵、手及其他物品時,應立即報告老師緊急處理,不得擅自處理。常見處理如下:
(1)皮膚破傷:先除盡異物,用無菌生理鹽水洗淨後,塗以2%紅汞或2%碘酒,必要時進行包紮。
(2)灼傷:塗以凡士林油,5%鞣酸或2%苦味酸。
(3)化學藥品腐蝕傷:若為強酸,先用大量清水衝洗,再以5%碳酸氫鈉或氫氧化銨溶液洗滌中和之;強堿腐蝕傷,則先以大量清水衝洗後,再用5%醋酸或5%硼酸溶液洗滌中和之。若受傷部位是眼部,經過上述步驟處理後,最後滴入橄欖油或液體石
臘1、2 滴,滋潤之。
(4)吸入病菌菌液:應立即吐入盛有消毒液的容器內消毒,並用1:1000高錳酸鉀漱口;根據菌類不同,必要時需服藥預防。
(5)細菌汙染衣物:應立即脫下,放入3%來蘇爾或3%氯胺液內浸泡半小時,或仔細包好經高壓蒸汽消毒後清洗。
(6)菌液汙染桌麵:傾倒適量2-3%來蘇爾或0.5% 84 消毒液於汙染處,浸泡半小時後抹去。若手上沾有活菌,應浸泡於上述消毒液10-20 分鍾後,再以肥皂水衝刷之。
7.看示教時,未經允許,不得移動顯微鏡推進尺。
8.愛護實驗室器材及設備,認真填寫實驗設備使用紀錄。不慎發生損壞時,應立即報告老師,照章賠償。
9.實驗結束後,凡使用過的實驗器材必須放在指定地點,如吸過菌液的吸管,毛細吸管要投入含有2-3%來蘇爾或0.1%新潔爾滅的玻璃筒中,或置“待消毒”處,不得放在桌上,亦不可衝洗於水槽內。用過的波片也應放於含有消毒液的容器內。需要培養的實
驗材料集中後放入溫箱中培養。
10.實驗完畢,應及時清理實驗室(包括桌麵,地麵,試驗用具等),值日生打掃室內衛生,管好門窗、水電。離開實驗室前,將雙手在消毒液內浸泡3-5分鍾,再用清水洗淨,方可離室。
三. 顯微鏡的使用
(一)普通光學顯微鏡的基本結構
光學顯微鏡的基本結構包括光學和機械兩個部分。光學部分主要有目鏡、物鏡、鏡筒、內置光源(或反光鏡)、光闌等;機械部分包括鏡座、鏡臂、調節螺栓、載物台、夾持器、
轉換器、粗調焦手輪及細調焦手輪等。(見圖1-1)

圖1 光學顯微鏡的基本結構示意圖
(二)顯微鏡(油鏡的使用)
顯微鏡的物鏡一般有低倍鏡、高倍鏡及油鏡。病原生物學實驗中最常用者為油鏡。
1.油鏡的原理 使用油鏡時需在玻片上滴加香柏油。由於從標本玻片上透過的光線,因介質密度不同,部分光線發生折射散失,使射入物鏡光線減少(高倍鏡孔徑較大,影響不顯著),因油鏡的孔徑較小,進入的光線則不夠,致使物象顯現不清。當在油鏡與標本片之間加香柏油後,香柏油折射率(n=1.515)和玻璃的折射率(n=1.52),因此可增加進入透鏡的光線,使視野亮度加強。
2. 在油鏡頭上常有下列幾種標記:①放大倍數是90×或100/;若鏡筒的長度不變,顯微鏡的放大倍數=目鏡倍數乘以物鏡的倍數。②鏡頭下緣有一白色線圈或黑色線圈;③刻有
“油”或外文“HI”、“Oel”、“Oil”等字樣。④油鏡頭的長度大於低倍鏡和高倍鏡。
3. 使用方法
① 對光 轉動轉換器,將低倍鏡鏡頭(4 倍、10 倍)轉至載物台中央透光孔位置,打開透光光闌,對光,直至目鏡中出現光線最明亮、最均勻的視場為止。顯微鏡的光源可分為內置光源和外置照明。內置光源:接通電源,按下底座的開關,電源打開即可。外置光源:將光圈放到最大位置,在用眼睛觀察目鏡的同時,轉動反光鏡使其朝向光源(自然光或燈光),使視野中的光線最明、均jun勻yun。如ru靠kao近jin光guang源yuan,可ke用yong平ping麵mian反fan光guang鏡jing,如ru距ju光guang源yuan較jiao遠yuan,可ke用yong凹ao麵mian反fan光guang鏡jing。根gen據ju所suo觀guan察cha的de標biao本ben,升sheng降jiang集ji光guang器qi和he縮suo放fang光guang圈quan,以yi獲huo最zui佳jia光guang度du。一yi般ban染ran色se標biao本ben用yong油you鏡jing檢jian查zha時shi,光guang度du宜yi強qiang,可ke將jiang光guang圈quan開kai足zu,集ji光guang器qi上shang升sheng至zhi與yu載zai物wu台tai相xiang平ping;檢查未染色標本用低倍鏡或高
倍鏡觀察時,應適當縮小光圈,下降集光器,使光度減弱。
② 裝片 將標本片放置在工作台的夾持器中,用夾持起移動標本片至工作台開口中心(透光孔處)。
③ 調節焦距 通過旋轉粗調焦手輪,將載物台升到最高限定位置(製片不能觸到物鏡),此時已準備好調焦。使用4 倍或10 beiwujing,zaimushimujingdetongshi,xuanzhuancutiaoshoulun,shigongzuotaihuanmanxiajiang,zaimushimujingzhongguanchadaodeqingxidetuxiangshi,zaitiaojieguanglanjuguangjingkong,xuanzeyuwujingxiangpipeidekong,tiaojieweitiaojiaoshoulun,shishiyezhongdetuxiangzuiqingxi。yongdibeijingzhaochubiaobendefanwei,ranhoutigaojingtong,zaibiaobendedaijianbuweijiayixiaodixiangbaiyou,manmanjiangyoujingtoujinyuyouzhong,danwujiechubopian。ranhou,zimujingchuyimianguancha,yimianweizhuandongcutiaojieqi,shijingtongxuxushangsheng,daikandaomohuwuxiangshi,gaiyongxitiaojieqitiaozhiwuxiangqingxi。ruguoshidipianbiaoben,xiandiyidibiaobenzaibopianshang,qingqinggaishanggaibopian。jiagaibopianshi,xianjianggaibopiandeyibianyuzaibopianshangdeshuidibianyuanjiechu,ranhouziyiceqingqingfangxia,xianzaidibeijingxiaguancha,ranhouzaigaobeijingxiaguancha,tongguogaibianguangquandedaxiaohuozhuandongxitiaojiaoshoulun。
④ 還鏡 觀察完畢把鏡頭和載玻片上的油用3%乙醚擦淨。將低倍鏡轉成八字型.降下聚光器, 轉動粗調節器,使鏡台下移,以免接物鏡與集光器相碰受損。罩上鏡套,放回原處。
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