1. 批量吸附法

    此法可在1天內完成提取過程，純化前後樣品體積變化不大
，所得IgG無變性現象，抗體效價亦無明顯降低。製品可達PAGE及免疫電泳純。適用於提純人、羊、兔等血清中的IgG。

 

    【材料和試劑】

    （1）DEAE-Sephadex A-50。

    （2）PB緩衝液：0.01mol/L，pH6.5 Na2HPO4-NaH2PO4緩衝液。

 

    【操作步驟】

    （1）A-50的預處理：稱取4～6g A-50懸浮於500～1000ml蒸餾水中，1h後傾去上層細粒。然後將A-50浸泡於0.5mol/L NaOH液（60～100ml）中，攪拌後靜置30min，以蒸餾水洗至中性，再用0.1mol/L NaH2PO4同上操作過程處理，蒸餾水洗至中性。最後用0.01mol/L，pH6.5 Na2HPO4-NaH2PO4緩衝液（PB）平衡，減壓抽幹，保存備用。

 

    （2）吸附提取：取15ml血清加等量0.01mol/L

，pH6.5 PB稀釋至30ml（也可不稀釋），加入1/4體積濾幹的DEAE-Sephadex A-50（相當於幹重1g）混合。室溫（或4℃）浸泡1 h後過濾
，收集濾液。再加入同樣體積的DEAE-Sephadex A-50重複上述處理過程共3次

，亦可在血清內加入過量DEAE-Sephadex A-50吸附處理一次。收集濾液合並，即為提純的IgG製品。或再透析去鹽，濃縮、凍幹保存備用。

 

      2．A-50柱層析法

     【材料和試劑】

     （1）DEAE-Sephadex A-50。

     （2）待純化標本：雜交瘤腹水或培養上清
，免疫血清或飽和硫酸銨粗提品。

     （3）1.5×50cm 層析柱

；透析袋及其他透析和層析所需的試劑和器材。

     （4）PB緩衝液：0.1mol/L，pH7.4 Na2HPO4-NaH2PO4緩衝液。

 

     【操作步驟】

     （1）A-50經酸堿處理，平衡至中性後
，浸泡於0.1mol/L


，pH7.4 PB中，置4℃冰箱儲存備用。

     （2）裝柱：同DE52。

     （3）平衡：鬆開出水口螺旋夾，以PB平衡
，控製流速為15滴/min

，待洗脫液與流出液之pH值達到一致時，停止平衡。

     （4）加樣
、洗脫、收集與濃縮：基本上同DE52，以0.1mol/L PB洗脫。

用過的DEAE-Sephadex A-50可用0.5mol/L Na2HPO4洗脫回收。洗至流出液中無蛋白（OD280nm<0.04）後再用蒸餾水洗至中性
，加入0.02％疊氮鈉於4℃保存備用。