采血
(一)材料與試劑
1.抗凝劑
(1)肝素:gansushihanliusuanjidezhanduotang,changyongqinayanhuojiayan,tanengzuzhiningxuemeiyuanzhuanhuaweiningxuemei,jineryizhixianweidanbaiyuanxingchengxianweidanbai,congerzuzhixueyeninggu。changyongdegansurongyenongduwei1 000U/ml,市售肝素多為100U~126U/mg。
(2)乙二胺四乙酸(EDTA):是一種螯合劑。用生理鹽水配製成4%的溶液備用。
(3)阿氏液(Alsever液),配方如下:
枸櫞酸鈉(Na3 C6 H5 O7 ·5H2 O) 0.80g
枸櫞酸 0.0325g
葡萄糖 2.05g
氯化鈉 0.42g
H2 O 加至 100.00ml
混勻溶解後,114.3℃高壓蒸汽滅菌10min備用。
阿氏液中既含有枸櫞酸鈉抗凝劑,又含有細胞生存的營養,所以它既可做抗凝劑,又可做血細胞的保存液。
2.針頭 根據不同動物和采血部位,采用不同型號的針頭,用前必須滅菌或消毒。
3.采血容器 注射器或三角瓶等。
4.采血動物。
(二)操作方法
1.采血法 各種動物采血方法不一。馬、牛、羊等大動物一般從頸靜脈采血,豬從頸靜脈、qianqiangjingmaihuoerjingmaicaixue,jiaqinyouyixiajingmaihuoxinzangcaixue,tuyouxinzanghuoerjingmaicaixue,quanyoujingjingmaihuosizhijingmaicaixue,tunshuyouxinzangcaixue,xiaobaishuzekeduanweihuojianduanyexiaxueguanhuojianduanyanqiucaixue。
2.抗凝 采集血液最關鍵的問題是抗凝,采用什麼方法進行抗凝,則根據實驗的要求和條件而定。最常用的方法如下:
(1)肝素抗凝:采血時,使每ml血液含15U~20U肝素即可。計算采集的血液量,按1 000U/mldeliangjiarugansu,zhijiefangrucaixuerongqizhong,caixueshi,biancaixuebianqingqingyaodong,shikangningjihexueyehunyun。duiyucaishaoliangdexueyehuoxiaodongwucaixue,kezhijieyongzhusheqichouquyidingliangdegansuye,zaicaixuezhijiekangning。
(2)EDTA抗凝:采血前,用滅菌生理鹽水將EDTA配製成4%溶液,然後按預采血液的量,以每ml血液加入1mg~2mg的EDTA的液體量於采血容器內。采血,並不斷搖動采血容器,使之混勻。
(3)玻璃珠法:預先將適量的玻璃珠(根據采血量多少而定)清(qing)洗(xi)後(hou),裝(zhuang)入(ru)采(cai)血(xue)容(rong)器(qi)中(zhong),滅(mie)菌(jun)後(hou)備(bei)用(yong)。采(cai)血(xue)過(guo)程(cheng)中(zhong),邊(bian)采(cai)邊(bian)搖(yao)采(cai)血(xue)瓶(ping),以(yi)使(shi)小(xiao)玻(bo)璃(li)珠(zhu)在(zai)血(xue)液(ye)中(zhong)滾(gun)動(dong),以(yi)機(ji)械(xie)地(di)除(chu)去(qu)纖(xian)維(wei)蛋(dan)白(bai),使(shi)血(xue)液(ye)不(bu)能(neng)凝(ning)固(gu)。本(ben)法(fa)雖(sui)較(jiao)麻(ma)煩(fan),但(dan)對(dui)淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao)的(de)活(huo)性(xing)影(ying)響(xiang)最(zui)小(xiao),且(qie)可(ke)減(jian)少(shao)血(xue)小(xiao)板(ban)的(de)混(hun)雜(za)。
(4)阿氏液采血:以阿氏液和采血量以1︰1比例采集血液,邊采邊輕輕搖動采血瓶,使之混勻。用阿氏液采血,除了抗凝外,多用於紅細胞的保存。一般在4℃條件下,阿氏液中保存的紅細胞2周其活性和特性不變。
紅細胞的分離技術
(一)材料與試劑
1.肝素等抗凝劑
2.3%明膠液 取明膠3g,溶於0.9%滅菌鹽水100ml中,114.3℃滅菌10min,冷卻後4℃冰箱保存。臨用時,37℃預熱10min。
3.阿氏液
(二)操作方法
1.采血抗凝,即為紅細胞。由於紅細胞與白細胞的比例相差懸殊,一般白細胞混雜在其中,忽略不計。
2.genjuhongxibaodeyongtu,kezuojinyibudechuli。rujisuanhongxibao,kezhijiexishijishu。ruxuzuobutijiehefanying,huoqitaronghongxibaofanying,zexujianghongxibaojinxingchongfendeqingxi,yichuqufuzhezaihongxibaomobiaomiandexuejiang。yibanyongdengshendexishiyelianxuqingxi,2 000r/min離心10min,重複3~4次。
3.如需儲藏備用,則以阿氏液做抗凝劑采血,混勻後置4℃冰箱保存,可保存2周,其活性尚可。
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