手機版
絕大多數細菌在適宜的條件下可以生長，細菌感染性患者標本隻有經過細菌的分離培養、鑒定和藥物敏感試驗，才可對感染性疾病進行病原學診斷並指導臨床用藥。因此，細菌培養對疾病的診斷、預防和治療具有重要的作用。
細菌分離培養主要用於臨床標本(如血液、痰、糞便等)huopeiyangwuzhongyouduozhongxijunshiduimouyizhongxijundefenli。tongguofenli，keshixijunzaipingbanshangfensanshengchang，bianyuguanchadangejunluotexing，yeyiyutiaoqudangejunluo，jinxingshenghuajianding。
一、基本條件
細菌分離培養的基本條件包括接種用具(接種環、接種針)、培養箱、培養基，以及無菌室和超淨工作台等。
(一)接種用具
包括接種環和接種針兩類。接種環用來挑取標本、菌液及平板劃線等。接種針則用來挑取單個菌落，穿刺高層瓊脂等。接種環(針)由環(針)、金屬柄和絕緣柄3部分組成，環(針)一般采用鉑絲製作最佳，其硬度適宜，易於傳熱，火焰滅菌後冷卻快，經久耐用。但因其價格昂貴，目前多用電熱(鎳)絲及l次性塑料接種環代替。
接種環的直徑一般為2～4mm，長5～8cm，定量接種環容量為1/300ml、1/200ml、1/100ml，用於定量培養。
(二)培養箱
1．普通培養箱 可自動調節培養溫度(一般為35～37℃)，用於培養普通需氧或兼性厭氧菌。
2．二氧化碳培養箱 可自動調節二氧化碳濃度(一般為5％～l0％)和(he)培(pei)養(yang)溫(wen)度(du)，用(yong)於(yu)分(fen)離(li)培(pei)養(yang)嗜(shi)血(xue)杆(gan)菌(jun)和(he)奈(nai)瑟(se)菌(jun)等(deng)生(sheng)長(chang)時(shi)需(xu)二(er)氧(yang)化(hua)碳(tan)的(de)細(xi)菌(jun)，尤(you)其(qi)是(shi)初(chu)次(ci)分(fen)離(li)培(pei)養(yang)時(shi)。如(ru)無(wu)二(er)氧(yang)化(hua)碳(tan)培(pei)養(yang)箱(xiang)時(shi)，也(ye)可(ke)用(yong)燭(zhu)缸(gang)法(fa)代(dai)替(ti)。
3．厭氧袋、厭氧罐(盒)和厭氧手套箱用於分離培養厭氧菌。厭氧袋為透明的、不透氣的塑料袋。厭氧罐為密封的塑料或玻璃罐(盒)，可用物理或化學方法去除袋、罐中的氧氣，達到無氧狀態。厭氧手套箱則可通過換氣裝置快速達到、持續保持無氧狀態，並自動調節培養溫度，還可通過手套在箱內進行分離接種、生化鑒定等操作。
(三)培養基
培養基(culture medium)是由人工方法配製而成的，適合微生物生長繁殖使用的混合營養物製品。適宜的培養基不僅可用於細菌的分離純化培養、傳代、菌種保存，還可用於研究細菌的生理、化學特性，是對病原菌分離鑒定的重要環節和必不可少的手段。培養基按其性狀分為固體、半固體和液體培養基；按其用途分為基礎、營養、選擇、鑒別和特殊培養基。
1．基礎培養基(based medium) 含有基礎生長所需的基本營養成分，最常用的是肉浸液，主要成分含牛肉浸液和蛋白腖。基礎培養基廣泛用於細菌的增菌、檢驗，也是製備其他培養基的基礎成分。
2．營養培養基(nutrient medium) 在基礎培養基中加入葡萄糖、血液、生長因子等特殊成分，供營養要求較高的細菌和需要特殊生長因子的細菌生長。最常用的是血瓊脂平板、巧克力平板等。
3．選擇培養基(selective medium) 在(zai)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)加(jia)入(ru)選(xuan)擇(ze)性(xing)抑(yi)製(zhi)物(wu)質(zhi)，有(you)利(li)於(yu)目(mu)的(de)菌(jun)的(de)檢(jian)出(chu)和(he)識(shi)別(bie)，而(er)抑(yi)製(zhi)其(qi)他(ta)非(fei)目(mu)的(de)菌(jun)。例(li)如(ru)，麥(mai)康(kang)凱(kai)瓊(qiong)脂(zhi)平(ping)板(ban)可(ke)以(yi)抑(yi)製(zhi)球(qiu)菌(jun)及(ji)革(ge)蘭(lan)陽(yang)性(xing)杆(gan)菌(jun)生(sheng)長(chang)，有(you)利(li)於(yu)腸(chang)道(dao)菌(jun)生(sheng)長(chang)，稱(cheng)弱(ruo)選(xuan)擇(ze)性(xing)培(pei)養(yang)基(ji)；SS瓊脂平板除有上述作用外，還可
抑製腸道非致病菌的生長，故稱強選擇性培養基。
4．鑒別培養基(differential medium)利li用yong細xi菌jun分fen解jie糖tang類lei和he蛋dan白bai質zhi的de能neng力li及ji其qi代dai謝xie產chan物wu的de不bu同tong，在zai培pei養yang基ji中zhong加jia入ru特te定ding的de作zuo用yong底di物wu和he指zhi示shi劑ji，用yong於yu觀guan察cha細xi菌jun各ge種zhong生sheng化hua反fan應ying，以yi鑒jian別bie和he鑒jian定ding細xi菌jun。例li如ru糖tang發fa酵jiao管guan、克氏雙糖鐵瓊脂(KIA)、伊紅-亞甲藍(美藍)瓊脂等。
5．特殊培養基(special medium) 包括厭氧培養基和細菌L型(xing)培(pei)養(yang)基(ji)等(deng)。前(qian)者(zhe)是(shi)培(pei)養(yang)專(zhuan)性(xing)厭(yan)氧(yang)菌(jun)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)，除(chu)含(han)營(ying)養(yang)成(cheng)分(fen)外(wai)，還(hai)加(jia)入(ru)還(hai)原(yuan)劑(ji)以(yi)降(jiang)低(di)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)氧(yang)化(hua)還(hai)原(yuan)電(dian)勢(shi)。後(hou)者(zhe)是(shi)針(zhen)對(dui)細(xi)胞(bao)壁(bi)缺(que)損(sun)的(de)細(xi)菌(jun)L型，由於胞內滲透壓較高，故培養基必須采用高滲低瓊脂培養基。
二、接種分離技術
為了從臨床標本中分離出病原菌並進行準確鑒定，除選擇好合適的培養基外，還要根據待檢標本的來源、培養目的及所使用培養基的性狀，采用不同的接種方法。
（一）平板劃線分離法
使shi標biao本ben或huo培pei養yang物wu中zhong混hun雜za的de多duo種zhong細xi菌jun在zai培pei養yang基ji表biao麵mian分fen散san生sheng長chang，各ge自zi形xing成cheng菌jun落luo。一yi般ban要yao求qiu單dan個ge菌jun落luo是shi一yi種zhong細xi菌jun的de純chun培pei養yang。但dan很hen多duo情qing況kuang下xia單dan個ge菌jun落luo並bing非fei隻zhi有you一yi種zhong細xi菌jun，特te別bie是shi標biao本ben直zhi接jie劃hua線xian的de開kai始shi區qu域yu生sheng長chang的de單dan個ge菌jun落luo分fen離li結jie果guo不bu純chun，一yi般ban選xuan擇ze菌jun落luo形xing成cheng較jiao稀xi少shao區qu域yu的de單dan個ge菌jun落luo，必bi要yao時shi先xian稀xi釋shi標biao本ben再zai劃hua線xian。待dai菌jun落luo長chang出chu，後hou，挑tiao選xuan單dan個ge菌jun落luo，轉zhuan種zhong到dao另ling一yi培pei養yang基ji中zhong，繼ji續xu實shi驗yan。平ping板ban劃hua線xian法fa可ke分fen為wei以yi下xia幾ji種zhong：
1．分區劃線法此法多用於糞便等含菌量較多的標本。先將標本均勻塗於平板表麵邊緣一小部分(第1區)；然後燒灼接種環，將環通過第l區3～4次，連續劃線(為第2區)；依次劃3、4區。平板上每l區的細菌數會逐漸減少，直至分離出單個菌落(圖5-4)。
2．連續劃線法 本(ben)法(fa)一(yi)般(ban)用(yong)於(yu)接(jie)種(zhong)含(han)菌(jun)數(shu)量(liang)相(xiang)對(dui)較(jiao)少(shao)的(de)標(biao)本(ben)或(huo)培(pei)養(yang)物(wu)。先(xian)將(jiang)標(biao)本(ben)均(jun)勻(yun)塗(tu)布(bu)於(yu)平(ping)板(ban)邊(bian)緣(yuan)一(yi)小(xiao)部(bu)分(fen)，並(bing)由(you)此(ci)開(kai)始(shi)，在(zai)平(ping)板(ban)表(biao)麵(mian)連(lian)續(xu)劃(hua)線(xian)並(bing)逐(zhu)漸(jian)下(xia)移(yi)，直(zhi)至(zhi)劃(hua)滿(man)平(ping)板(ban)表(biao)麵(mian)。
3．棋盤格劃線法此法多用於含菌量較多的臨床標本，如痰、糞便等標本的初代分離培養。其優點是整個平板的3/4～4/5區
域(即棋盤格範圍)均為有效分離區。將標本塗布於平板約l/5處，接種環經火焰滅菌後，自原處做平行劃線5～6條。接種環燒灼後冷卻，劃垂直線5～6條，形成正方形格；再以同法劃兩排斜線，使呈棋盤形。
(二)斜麵接種法
該gai法fa主zhu要yao用yong於yu純chun種zhong增zeng菌jun及ji保bao存cun菌jun種zhong。挑tiao取qu單dan個ge菌jun落luo從cong斜xie麵mian底di部bu自zi下xia向xiang上shang劃hua一yi條tiao直zhi線xian，再zai從cong底di部bu開kai始shi向xiang上shang劃hua曲qu線xian接jie種zhong，盡jin可ke能neng密mi而er勻yun，或huo者zhe直zhi接jie自zi下xia而er上shang劃hua曲qu線xian接jie種zhong。
(三)液體接種法
以接種環沾取菌種，傾斜液體培養管，在液麵與管壁交界處研磨接種物(以試管直立後液體應淹沒接種物為準)。多用於普通肉湯、蛋白腖水等液體培養基的接種。
(四)穿刺接種法
此法用於保存菌種、觀(guan)察(cha)動(dong)力(li)及(ji)某(mou)些(xie)生(sheng)化(hua)反(fan)應(ying)。以(yi)接(jie)種(zhong)針(zhen)挑(tiao)取(qu)細(xi)菌(jun)培(pei)養(yang)物(wu)，插(cha)入(ru)半(ban)固(gu)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)中(zhong)央(yang)，穿(chuan)刺(ci)至(zhi)培(pei)養(yang)基(ji)底(di)部(bu)，然(ran)後(hou)沿(yan)原(yuan)穿(chuan)刺(ci)線(xian)退(tui)出(chu)接(jie)種(zhong)針(zhen)。其(qi)他(ta)操(cao)作(zuo)與(yu)斜(xie)麵(mian)接(jie)種(zhong)類(lei)似(si)。
(五)傾注平板法
取純培養物的稀釋液或原標本，混勻於已融化並冷卻到50℃左右15ml的瓊脂管中，無菌法傾注於無菌平皿，凝固後培養，進行菌落計數。該法適用於兼性厭氧菌或厭氧菌稀釋定量培養，也用於飲料、牛乳和尿液等液體標本活細菌計數。
