（1）調試和校準：流式細胞計在使用前，甚至在使用過程中都要精心進行調試
，以保證工作的可靠性和最佳性。調試的項目主要是激光強度、液流速度和測量區的光路等。

　　激光強度：除調整反射鏡的角度以調整到所需波長的激光出光外，還要結合顯示屏上的光譜曲線使激光的強度輸出為最大。

　　液流速度：可通過操作台數字顯示監督，調節　氣體壓力大小以獲得穩定的液流速度。

　　測量區光路調節　：這是調試工作的關鍵。需要保證在測量區的液流
、激光束、90。散射測量光電係統垂直正交
，而且交點較小。一般可在用標準熒光微球等校準中完成。

　　流式細胞術中所測得的量是相對值，因此需要在使用前或使用中對係統進行校準或標定
，這樣才能通過相對測量獲得絕對的意義。因而FCM中的校準具有雙重功能：儀器的準直調整和定量標度。標準樣品應該穩定，有形成份形狀應是大小比較一致球形，樣品分散性能良好，且經濟
、容(rong)易(yi)獲(huo)得(de)。常(chang)用(yong)標(biao)準(zhun)熒(ying)光(guang)微(wei)球(qiu)作(zuo)為(wei)非(fei)生(sheng)物(wu)學(xue)標(biao)準(zhun)樣(yang)品(pin)
，雞(ji)血(xue)紅(hong)細(xi)胞(bao)做(zuo)為(wei)生(sheng)物(wu)學(xue)標(biao)準(zhun)樣(yang)品(pin)。微(wei)球(qiu)用(yong)樹(shu)脂(zhi)材(cai)料(liao)製(zhi)作(zuo)，或(huo)標(biao)有(you)熒(ying)光(guang)素(su)，或(huo)不(bu)標(biao)記(ji)熒(ying)光(guang)素(su)。Flow Cytometry Stands公司可提供熒光強度藥盒
，在免疫實驗中可用來作為定
熒光標準來測定每個細胞所標記的抗原位點數目。所用的雞血紅細胞標準樣品製作過程昭下：取3.8%枸櫞酸或肝素抗凝的雞血（抗凝劑：雞血=1：4），經PBS清洗3次

，再用5～10ml的1.0%戊二醛與清洗後的雞紅細胞混合，室溫下振蕩醛化24h，最後經PBS再清洗，貯4℃冰箱中備用。需要指出的是因為未經熒光染色，所測光信號為雞血紅蛋白的自發熒光。

　　（2）儀器的操作和使用：

　　①打開電源，對係統進行預熱；

　　②打開氣體閾
，調節　壓力，獲得適宜的液流速度；開啟光源冷卻係統；

　　③在樣品管中加入去離子水
，衝洗液流的噴嘴係統；

　　④利用校準標準樣品
，調整儀器，使在激光功率、光電倍增管電壓、放大器電路增益調定的基礎上

，0。和90。散射的熒光強度最強
，並要求變異係數為最小；

　　⑤選定流速
、測量細胞數
、測量參數等，在同樣的工作條件下測量樣品和對照樣品
；同時選擇計算機屏上數據的顯示方式
，從而能直觀掌握測量進程；

　　⑥樣品測量完畢後，再用去離子水衝洗液流係統；

　　⑦因為實驗數據已存入計算機硬盤（有的機器還備有光盤係統，存貯量更大），因此可關閉氣體
、測量裝置，而單獨使用計算機進行數據處理；

　　⑧將所需結果打印出來。

　　在操作和使用中一定要注意如下事項：　

　　1）光電倍增管要求穩定的工作條件，暴露的較強的光線下以後，需要較長時間的“暗適應”以消除或降低部分暗電流本底才能工作
；另外還要注意磁屏蔽；

　　2）光源不得在短時間內（一般要1h左右）關上又打開；使用光源必須預熱並注意冷卻係統工作是否正常；

　　3）液流係統必需隨時保持液流暢通，避免氣泡栓塞
，所使用的鞘流液使用前要經過過濾、消毒；

　　4）注意根據測量對象的變換選用合適的濾片係統、放大器的類型等；

　　5）特別強度每次測量都需要對照組。