近jin年nian來lai,隨sui著zhe多duo功gong能neng酶mei標biao儀yi在zai國guo內nei各ge高gao校xiao實shi驗yan室shi逐zhu漸jian推tui廣guang開kai來lai,多duo功gong能neng酶mei標biao儀yi品pin牌pai和he型xing號hao也ye逐zhu漸jian多duo了le起qi來lai,亂luan花hua漸jian欲yu迷mi人ren眼yan。除chu了le三san大da傳chuan統tong優you勢shi品pin牌paiPE、MD和TECAN,還出現了眾多後來者插足此市場,如收購了芬蘭雷勃的Thermo、從發光起家的Berthold、針對藥篩領域的BMG以及新興的BioTek等品牌。各品牌都有各自的一個甚至多個係列產品線,特性各不相同,選購時各種技術參數、技術指標令人眼花繚亂
本文嚐試從用戶實際使用的角度,探討應該如何看待花樣繁多的參數特性,希望能幫助大家找到真正合適自己的多功能酶標儀。
一、濾片Vs光柵
duogongnengmeibiaoyidefenleifangfazhongduo,danzuijiandandemoguoyuyongtamendelvguangfangshilaizuofenjiexian。yibanlaishuo,keyifenweilvguangpianxingheguangzhaxingliangdalei。dangranyeyouyixiexinghao,liruSynergy4和EnVision等deng,一yi台tai機ji器qi裏li麵mian同tong時shi裝zhuang上shang了le濾lv光guang片pian和he光guang柵zha。但dan是shi濾lv片pian和he光guang柵zha並bing不bu能neng同tong時shi完wan成cheng同tong一yi個ge檢jian測ce,還hai是shi想xiang用yong光guang柵zha的de時shi候hou用yong光guang柵zha,該gai用yong濾lv片pian的de時shi候hou用yong濾lv片pian;haiyouyixieshiyanfeiyongqizhongyigebuke,lingyimokuaishixianbulede。suoyizheleiyiqibenzhishanghaizhishibalvpianheguangzhafangzaileyiqi,bingmeiyoushiliangzherouheerchanshengxindejishutupo。
總體來說,濾片技術由於發展已久,配合二向色鏡(其實也就是另一模式的濾光反光濾鏡)等光路係統,可以實現大部分實驗的需要。目前常規多功能酶標儀中最高的檢測靈敏度就是用濾光片型做出來的,例如TECAN Infinite F500的熒光檢測的靈敏度可以達到0.04 fmol/孔(熒光素,384孔/80ul)。
但是濾光片型儀器由於受限於濾片的波長和數量限製,不可能滿足日益增加的實驗類型的檢測需要,而且有時需要對物質的吸收、激發和發射光譜進行研究,所以後來就誕生了光柵型的儀器。
最先推出光柵的是MD公司,其光柵習慣上稱為單光柵。由於光純度的不足,在光柵的後麵又加入了一組帶阻濾片,再把雜光過濾一遍,達到了5×10-4的雜光率,基本與純粹的濾光片係統一致。後來TECAN又發展出了雙光柵技術,通過兩次光柵濾光,雜光率降到了10-6。後來,Thermo、BioTek和PE的部分新款儀器等都使用了類似雙光柵技術。由於激發和發射各用了一組雙光柵,此類機器又被稱為四光柵型多功能酶標儀。
光柵型酶標儀的推陳出新,使得用戶在波長選擇上不再受限,而且在雜光率、帶寬控製等性能上還超越了濾光片係統。例如,TECAN公司在2008年底推出使用了第三代四光柵係統的M1000酶標儀,雜光率降到了2×10-7的新低,還實現了帶寬2.5~20nm連續可調。這些都是目前濾光片型酶標儀所不能或者較難實現的。
二、雜光率&波長準確性
光(guang)柵(zha)型(xing)濾(lv)光(guang)係(xi)統(tong)儼(yan)然(ran)已(yi)經(jing)成(cheng)為(wei)了(le)目(mu)前(qian)通(tong)用(yong)性(xing)多(duo)功(gong)能(neng)酶(mei)標(biao)儀(yi)的(de)主(zhu)流(liu),多(duo)家(jia)廠(chang)家(jia)共(gong)同(tong)努(nu)力(li),已(yi)經(jing)把(ba)光(guang)柵(zha)技(ji)術(shu)推(tui)到(dao)了(le)曆(li)史(shi)新(xin)高(gao)。在(zai)光(guang)柵(zha)的(de)眾(zhong)多(duo)技(ji)術(shu)參(can)數(shu)之(zhi)中(zhong),最(zui)關(guan)鍵(jian)的(de)無(wu)疑(yi)就(jiu)是(shi)光(guang)柵(zha)的(de)雜(za)光(guang)率(lv)和(he)波(bo)長(chang)選(xuan)擇(ze)的(de)準(zhun)確(que)性(xing)了(le)。
雜光率指得就是光源通過光柵後,得到的光線中,“不需要”的波長的光占所標稱波長的光的比例,表征了濾光的純度。由於光線幹涉、衍yan射she等deng的de複fu雜za性xing,無wu論lun使shi用yong濾lv光guang片pian還hai是shi光guang柵zha,雜za光guang都dou是shi不bu可ke避bi免mian的de。各ge種zhong濾lv光guang技ji術shu的de本ben質zhi就jiu是shi要yao想xiang辦ban法fa把ba雜za光guang盡jin可ke能neng地di去qu掉diao。一yi般ban來lai說shuo,濾lv光guang片pian型xing的de雜za光guang率lv在zai10-4~10-5之間,光柵型的可以做到10-6~10-7。由you於yu此ci類lei雜za光guang是shi非fei特te異yi的de,而er且qie會hui直zhi接jie進jin入ru最zui後hou的de檢jian測ce器qi,所suo以yi有you多duo少shao的de雜za光guang就jiu會hui引yin入ru多duo少shao的de隨sui機ji誤wu差cha。在zai熒ying光guang等deng檢jian測ce過guo程cheng中zhong,由you於yu檢jian測ce器qi存cun在zai放fang大da效xiao應ying,雜za光guang率lv的de幹gan擾rao也ye會hui被bei指zhi數shu級ji放fang大da。因yin此ci,雜za光guang率lv就jiu是shi一yi個ge濾lv光guang係xi統tong的de首shou要yao性xing能neng指zhi標biao。
光柵的另一個重要指標就是波長選擇的準確性。因為很多檢測是依賴於物質在某個波長的特征圖譜。就像DNA/RNA的OD260濃度測定,實際檢測波長偏離260nm幾個nm以上的話,OD值與最終濃度之間的數學關係就會發生改變。因此,一組性能優良的光柵係統,他的波長選擇準確性應該是在±0.5~1nm之間。波長偏離過大有時就會影響到最終結果的準確性。
這(zhe)兩(liang)個(ge)可(ke)謂(wei)是(shi)光(guang)柵(zha)甚(shen)至(zhi)濾(lv)光(guang)片(pian)濾(lv)光(guang)係(xi)統(tong)最(zui)關(guan)鍵(jian)的(de)技(ji)術(shu)參(can)數(shu),直(zhi)接(jie)影(ying)響(xiang)到(dao)的(de)是(shi)得(de)到(dao)數(shu)據(ju)是(shi)否(fou)是(shi)真(zhen)正(zheng)所(suo)要(yao)測(ce)量(liang)的(de)結(jie)果(guo),是(shi)實(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)可(ke)靠(kao)性(xing)的(de)最(zui)基(ji)本(ben)要(yao)求(qiu)。
三、認證>參數
在保證檢測可靠的基礎上,不同儀器的下一個差異就體現在檢測的靈敏度上麵,這時人們關心的就是儀器能夠檢測到多弱的信號。
靈ling敏min度du涉she及ji了le整zheng個ge光guang路lu係xi統tong的de設she計ji和he選xuan料liao,很hen難nan說shuo某mou一yi個ge部bu件jian會hui起qi決jue定ding性xing作zuo用yong。但dan是shi有you一yi點dian,在zai各ge種zhong單dan功gong能neng檢jian測ce項xiang目mu中zhong,光guang吸xi收shou檢jian測ce用yong非fei放fang大da型xing的de光guang電dian二er極ji管guan、熒光檢測用光電倍增管、發光檢測用專門設計的單光子計數光電倍增管,這三種不同的檢測器是各自檢測領域的優先選擇。
各(ge)單(dan)項(xiang)檢(jian)測(ce)的(de)最(zui)優(you)結(jie)果(guo)都(dou)是(shi)用(yong)相(xiang)應(ying)檢(jian)測(ce)器(qi)完(wan)成(cheng)的(de)。當(dang)然(ran)也(ye)有(you)的(de)儀(yi)器(qi)出(chu)於(yu)成(cheng)本(ben)等(deng)考(kao)慮(lv),用(yong)一(yi)個(ge)檢(jian)測(ce)器(qi)兼(jian)容(rong)多(duo)種(zhong)檢(jian)測(ce)模(mo)式(shi),這(zhe)在(zai)一(yi)定(ding)程(cheng)度(du)上(shang)也(ye)能(neng)完(wan)成(cheng)實(shi)驗(yan)需(xu)求(qiu),但(dan)是(shi)在(zai)性(xing)能(neng)上(shang)也(ye)會(hui)有(you)所(suo)犧(xi)牲(sheng)折(zhe)中(zhong),無(wu)法(fa)實(shi)現(xian)各(ge)項(xiang)檢(jian)測(ce)都(dou)達(da)到(dao)最(zui)優(you)化(hua)。
關guan於yu靈ling敏min度du的de定ding義yi和he檢jian測ce標biao準zhun,每mei個ge廠chang家jia都dou有you各ge自zi的de描miao述shu,都dou會hui說shuo自zi己ji是shi怎zen樣yang怎zen樣yang好hao,很hen難nan有you一yi個ge直zhi觀guan的de客ke觀guan比bi較jiao。因yin此ci,某mou些xie試shi劑ji廠chang家jia就jiu站zhan了le出chu來lai,對dui某mou些xie儀yi器qi的de檢jian測ce性xing能neng提ti供gong一yi個ge第di三san方fang的de認ren證zheng。
比較常見的是發光檢測領域裏麵的Promega公司DLReady認證,熒光檢測領域的Invitrogen公司的LanthaScreen係列認證、Cisbio公司的HTRF認證、BellBrook實驗室的Transcreener認證等等。這些認證主要是針對公司提供的某一類型的要求較高的試劑盒,涵蓋了對檢測儀器的各種性能要求,包括:檢測方法是否能用,靈敏度、線性範圍、孔間幹擾等是否滿足要求等等。
如果需要做相關的實驗,例如做Luciferase發光檢測的就看看儀器是否有DLReady認證、做TR-FRET的就看看HTRF認證、做FP就看看Transcreener認(ren)證(zheng),如(ru)果(guo)機(ji)器(qi)擁(yong)有(you)相(xiang)關(guan)的(de)認(ren)證(zheng),就(jiu)可(ke)以(yi)說(shuo)明(ming)該(gai)機(ji)器(qi)在(zai)一(yi)定(ding)程(cheng)度(du)上(shang)能(neng)夠(gou)較(jiao)好(hao)地(di)滿(man)足(zu)類(lei)似(si)檢(jian)測(ce)的(de)各(ge)種(zhong)需(xu)求(qiu),遠(yuan)比(bi)單(dan)單(dan)比(bi)較(jiao)一(yi)個(ge)靈(ling)敏(min)度(du)參(can)數(shu)更(geng)能(neng)說(shuo)明(ming)問(wen)題(ti)。因(yin)為(wei)一(yi)個(ge)實(shi)驗(yan)能(neng)否(fou)做(zuo)好(hao)並(bing)不(bu)是(shi)單(dan)單(dan)一(yi)個(ge)靈(ling)敏(min)度(du)就(jiu)能(neng)表(biao)征(zheng)的(de)。
需要特別注意的是,LanthaScreen是一個係列的認證,涵蓋了FI、FRET、TRF、FP等多個子項目,不同儀器所通過的子項目是不一樣的,需要上Invitrogen網站仔細查詢核對。
光guang柵zha型xing的de儀yi器qi由you於yu新xin技ji術shu近jin幾ji年nian才cai逐zhu漸jian興xing起qi,受shou限xian於yu技ji術shu研yan發fa和he儀yi器qi成cheng本ben,同tong一yi個ge價jia格ge範fan圍wei內nei的de靈ling敏min度du等deng指zhi標biao會hui略lve差cha於yu發fa展zhan成cheng熟shu的de濾lv光guang片pian機ji器qi。所suo以yi,在zai中zhong檔dang多duo功gong能neng酶mei標biao儀yi領ling域yu,拿na到dao了le各ge種zhong認ren證zheng的de光guang柵zha型xing儀yi器qi並bing不bu多duo見jian。而er作zuo為wei新xin一yi代dai光guang柵zha型xing酶mei標biao儀yi的de代dai表biao作zuo,TECAN M1000已經拿到了全部上述四種認證,而且在靈敏度等單項性能上也已經超越了不少的中高端濾片型酶標儀。
這(zhe)說(shuo)明(ming)了(le)光(guang)柵(zha)型(xing)酶(mei)標(biao)儀(yi)的(de)研(yan)發(fa)又(you)進(jin)入(ru)了(le)一(yi)個(ge)新(xin)的(de)高(gao)度(du),除(chu)了(le)在(zai)靈(ling)活(huo)性(xing)上(shang)取(qu)得(de)了(le)無(wu)可(ke)替(ti)代(dai)的(de)作(zuo)用(yong)外(wai),還(hai)在(zai)檢(jian)測(ce)靈(ling)敏(min)度(du)等(deng)方(fang)麵(mian)也(ye)逐(zhu)漸(jian)替(ti)代(dai)傳(chuan)統(tong)的(de)濾(lv)光(guang)片(pian)型(xing)酶(mei)標(biao)儀(yi)。光(guang)柵(zha)型(xing)是(shi)科(ke)研(yan)領(ling)域(yu)多(duo)功(gong)能(neng)酶(mei)標(biao)儀(yi)的(de)未(wei)來(lai)主(zhu)要(yao)發(fa)展(zhan)趨(qu)勢(shi);而濾光片型儀器也正在往單項性能更優的方麵改進。
四、比色杯+微量檢測
除了常規的6~384/1536孔酶標板檢測之外,有些儀器還附帶了比色杯、微量檢測板等的兼容功能。無論是使用立式比色杯、臥wo式shi比bi色se杯bei還hai是shi各ge種zhong微wei量liang檢jian測ce板ban,其qi目mu的de都dou是shi給gei光guang程cheng不bu固gu定ding的de酶mei標biao板ban檢jian測ce引yin入ru一yi個ge標biao準zhun光guang程cheng的de概gai念nian。雖sui然ran酶mei標biao板ban檢jian測ce也ye能neng通tong過guo光guang程cheng校xiao正zheng等deng方fang式shi實shi現xian10mm光程ODzhidehuansuan,danzhezhishiyigeshuxuezhuanhuanguocheng,jiancewuchaleijijiaoduo,shijishiyongxiaoguobujia。yinrubisebeiheweiliangjiancebanhou,guangxishoudejianceguangchengjiubeigudingzai10mm或者0.5mm等的標準長度,ODzhihuansuangengjiajiandanhezhunque。fudailecileijiancegongnengdemeibiaoyi,xiangdangyuchulebenshendeduogongnengmeibiaojiancezhiwai,hainengtidaibufenfenguangguangdujidegongneng,shiqigongnenggengjiaquanmian,yiqidexingjiabigenggao。
五、品牌與售後
不同品牌的儀器往往性能側重點有所不用。例如,PE公司由於在試劑領域有較深底蘊,他們的酶標儀在配合使用他們的TRF係列檢測試劑盒上作了多項優化,因此PE的酶標儀普遍來說在TRF領域會有較多的特色功能和相對較高的性能指標。而像TECAN,就把研發的重點放在了四光柵的研究方麵,近年來相繼推出了第二和第三代光柵型多功能酶標儀(M200、M1000),成為四光柵酶標儀領域的領頭羊。而像多功能酶標儀上加入比色杯、微量檢測板等功能也是TECAN從用戶角度考慮作出的技術創新,後來此類技術都成為了Thermo、BioTek等品牌紛紛仿效的對象。
zuihou,wulunshiyitaiduohaodemeibiaoyi,tuolilelianghaodeshouhoufuwutixiyeshinanyizhengchangyunzuode。jinnian,gejiachangshangdouzaizhongguoguoneishelilebanshichushenzhiyataiquzongbu,youxiechanpinhaizhuanmenyanfalezhongwenbanderuanjianheshuomingshu。zhedoushuominglechangjiaduizhongguoshichangdezhongshi。erzhengyinweizhezhongzhongshi,wulunshichangjiazhixiaohaishixuanzedailifenxiao,douhuiduiguoneideshouhoufuwutichugezideyaoqiuheqiwang,zuijibendejiushipujiyiqideyingyonggongchengshiheweixiugongchengshiwangluotixi。
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