組成成分
營養物質
不同的細菌對營養的要求不同,但細菌需要的營養物質應含有氨源、碳源、無機鹽類和生長因子等。
1、蛋白:最常用的成分之一, 提供細菌生長繁殖所需要的氮源,含腖、多肽和多種氨基酸,為大多數細菌生長所利用。易溶於水遇酸不沉澱,不因受高溫而凝固,為兩性電解質有緩衝作用。
2、肉浸液:用新鮮牛肉浸泡、煮(zhu)沸(fei)而(er)製(zhi)成(cheng)的(de)肉(rou)汁(zhi)。含(han)有(you)可(ke)溶(rong)性(xing)含(han)氮(dan)浸(jin)出(chu)物(wu)和(he)非(fei)含(han)氨(an)漫(man)出(chu)物(wu),還(hai)有(you)一(yi)些(xie)生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)。可(ke)為(wei)細(xi)菌(jun)提(ti)供(gong)氨(an)源(yuan)和(he)碳(tan)源(yuan),但(dan)所(suo)含(han)氮(dan)物(wu)質(zhi)過(guo)少(shao)不(bu)能(neng)滿(man)足(zu)細(xi)菌(jun)的(de)需(xu)要(yao),因(yin)此(ci)在(zai)製(zhi)備(bei)培(pei)養(yang)基(ji)應(ying)加(jia)入(ru)1%~ 2%的蛋白腖和0.5%氯化鈉。
3、牛肉膏:由肉浸液經長時間加熱濃縮而製成。糖類在加熱過程中被破壞,其營養價值低於肉浸液,可用作腸道杆菌鑒別培養基的基礎成分。
4、糖類、醇類:為細菌生長提供碳源和能源。製備培養基所用的糖類、醇類有多種,常用的糖類有單糖、雙糖和多糖;常用的醇類有甘露醇、衛茅醇等。葡萄糖、蔗糖主要作為碳源和能源的基本成分,其他糖類和醇類主要用於鑒定細菌所做的發酵反應。
5、血液:血液中含有多種營養物質,又能提供輔酶、血紅素等特殊生長因子,用於培養營養要求較高的細菌。還可根據細菌在血液培養基中的溶血現象而進行鑒定。
6、無機鹽類:提供細菌生長的各種元素,如鉀、鈉、鐵、鎂、鈣、磷、硫等。最常用的有氯化鈉和磷酸鹽,前者維持酶的活性、調節菌體內外的滲透壓,後者是細菌良好的磷源,並具有緩衝作用。
7、雞蛋和動物血清:不bu是shi基ji本ben成cheng分fen,是shi某mou些xie細xi菌jun生sheng長chang所suo必bi需xu的de營ying養yang物wu質zhi,僅jin用yong於yu製zhi備bei特te殊shu的de培pei養yang基ji。如ru培pei養yang結jie核he分fen枝zhi杆gan菌jun的de雞ji蛋dan培pei養yang基ji和he培pei養yang白bai喉hou杆gan菌jun的de呂lv氏shi血xue清qing培pei養yang基ji等deng。
8、生長因子:為細菌生長所必需的,需要量很小。常在肝浸液、肉浸液、醇母浸液和含血液培養基中加入維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等生長因子。
凝固物質
製備固體培養基時,需在液體中加入凝固物質。常用凝固物質為瓊脂,某些情況下也可用明膠、卵白蛋白、血清等。瓊脂是從石花菜中提取出來的一種半乳糖膠,溫度在98℃以上時可溶於水,在45℃以下可凝固成凝膠狀態,不被細菌分解利用,無營養作用。
抑製劑和指示劑
製備培養基時常加入抑製劑和指示劑,不是細菌生長繁殖所必需的物質,而是選擇、鑒定及判斷結果的需要。
1、抑製劑:具有選擇抑製作用,在製備培養基 時加入定種類的抑製劑, 可抑製非檢出菌(非病原菌)的生長,利於檢出菌(病原菌)的生長,常用有膽鹽,煌綠、亞硫酸鈉、亞硒酸鈉及-些染料和某些抗生素等。
2、指示劑:在培養基中加入一定種類的指示劑, 觀察細菌是否利用和分解培養基中的糖、醇類。常用的有粉紅、甲基紅、中性紅、溴甲酚紫、溴麝香草酚藍和中國藍等酸堿指示劑。亞甲藍常用作氧化還原指示劑。
種類
1、基礎培養基:含有細菌基礎生長所需的基本營養成分,最常用的是肉浸液,俗稱肉湯,主要含生肉浸液和蛋白腖,用於細菌的增菌、檢驗,也是製備其他培養基的基礎成分。
2、營養培養基:基礎培養基中加入血液、 葡萄糖、生長因子等特殊成分,供營養要求高的細菌和需要特殊生長因子的細菌生長,最常用的是血瓊脂平板和巧克力血平板等。
3、鑒別培養基:在某些培養基中加入一些特定物質, 如糖、苷、醇類、氨基酸、蛋白質等和指示劑,測定細菌的生化反應,以鑒別和鑒定細菌用的培養基。例如糖發酵管、克氏雙糖鐵瓊脂(KIA)、伊紅-亞甲藍瓊脂和動力-吲哚-尿素(MIU) 培養基等。
4、選擇培養基:在培養基中加入抑製劑,抑製標本中雜菌生長,有助於所選擇的細菌種類的生長。如培養腸道致病菌的沙門-誌賀瓊脂。
5、特殊培養基:某些細菌在生長繁殖時需要特殊的條件才能夠生長,包括厭氧培養基和細菌L型培養基等。前者是培養專性厭氧菌的培養基,後者是針對細胞壁缺損的細菌L型。
分離培養基的選擇
1、血平板:適合各類細菌的生長,一般細菌檢驗標本的分離,都應接種此平板。
2、巧克力血平板:含有V和X因子,適於接種疑有嗜血杆菌、奈瑟菌等的標本。
3、中國藍平板或伊紅亞甲藍平板:抑yi製zhi革ge蘭lan陽yang性xing細xi菌jun,促cu進jin革ge蘭lan陰yin性xing細xi菌jun生sheng長chang,是shi較jiao好hao的de弱ruo選xuan擇ze性xing培pei養yang基ji。發fa酵jiao型xing革ge蘭lan陰yin性xing杆gan菌jun在zai此ci平ping板ban上shang菌jun落luo顏yan色se不bu同tong,便bian於yu鑒jian別bie菌jun種zhong。
4、麥康凱平板:為中等強度選擇性,抑菌力略強,少數革蘭陰性菌不生長。在麥康凱平板上能否生長,是非發酵菌鑒定的一個依據。
5、沙門-誌賀瓊脂:有較強的抑菌力,用於誌賀菌和沙門菌的分離。因選擇性過強,影響檢出率,使用時最好加一種弱選擇平板以配對互補。
6、堿性瓊脂或TCBS瓊脂:用於從糞便中分離霍亂弧菌及其他弧菌。
7、血液增菌培養基:用於從血液、骨髓中分離常見病原菌。
8、營養肉湯:用於標本及各類細菌的增菌。
如痰標本一般選用血平板、中國藍/麥康凱、巧克力平板做分離。中國藍/麥康凱用於篩選革蘭陰性杆菌;血平板則用於肺炎鏈球菌、白喉棒狀杆菌等的分離:而含杆菌肽的巧克力平板則用於篩選嗜血杆菌等。
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