Ä¿µÄ ̽ÌÖʳƷÌí¼Ó¼ÁKBrO3¶Ô²¸ÈéÀà×éÖ¯ÖÐ82ôÇ»ùÄñàÑßÊÌÇ»ùøµÄÑõ»¯ÓÕµ¼×÷Ó᣷½·¨ ±È½ÏÓÃKBrO3´¦Àí´óÊóºó,ÆäÉöºÍ¸ÎÖÐÐÞ¸´Ã¸»îÐԵı仯¹æÂÉ¡£Ã¸»îÐÔ·ÖÎöÓøßЧҺÏàÉ«Æ×Pµç»¯Ñ§¼ì²â·¨¡£½á¹û ¸¹Ä¤Ï¸øÓè80mgPkg¼ÁÁ¿KBrO3ºó,ÔÚÉöÔà·¢ÏÖø»îÐÔÔÚ3hʱÏÔÖøÉý¸ß,¶øÔÚ6hʱ,Æä»îÐÔ´ïµ½¸ß´óÖµ(1.25±0.14)pmol,¸ÃÖµÊÇ0hµÄ6±¶¡£È»ºó,»îÐÔ¿ªÊ¼Ï½µ²¢ÔÚ12h»Øµ½0hˮƽ;²»¼Ó´¦Àíʱ,Æä»îÐÔÖ»ÓÐ(0.20±0.06)pmol,¶øÔÚ20¡¢40¡¢80¼°160mgPkgKBrO3¸¹Ä¤Ï¸øÓèʱ,Æä»îÐÔ·Ö±ðÊÇ(0.33±0.09)¡¢(0.53±0.10)¡¢(0.75±0.13)¼°(1.30±0.08)pmol,ÔÚ40mgPkgÒÔÉÏʱ»îÐÔÏÔÖøÔö¸ß,ÇÒÏÔʾ¼ÁÁ¿·´Ó¦¹ØÏµ¡£ÔÚÉöÖй۲쵽¸Ãø»îÐԱ仯ÊÇʱ¼äÓë¼ÁÁ¿ÒÀÀµÐÔµÄ,¶øÔÚ¸ÎÖÐδ·¢ÏÖÕâÖֱ仯¡£½áÂÛ ²¸ÈéÀà×éÖ¯ÖÐ82ôÇ»ùÄñàÑßÊÌÇ»ùøÄܱ»Ñõ»¯ÓÕµ¼,ÌáʾDNAÖÐÑõ»¯ËðÉ˵ÄÐÞ¸´ÊÇ»úÌåÔÚÓÐÑõ»·¾³ÖÐÉú´æµÄÖØÒª¹ý³Ì¡£
DNAÖеÄÄñàÑßÊÈÝÒ×±»»îÐÔÑõ×ÔÓÉ»ùôÇ»¯³ÉΪ8-ôÇ»ùÄñàÑßÊ,ÕâÖÖ¼î»ù¸Ä±äÄÜÓÕµ¼GCyTAת»¯,ÒÑ֤ʵDNAÑõ»¯ËðÉËÓëÐÄѪ¹Ü¼²²¡¡¢ÀÏ»¯µÈÂýÐÔ²¡Óйء£Òò´ËÉúÎïÌå´æÔÚÔ¤·À8-ôÇ»ùÄñàÑßÊËùÖÂÒÅ´«½á¹¹ÍêÕûÐÔË𺦵ķÀÓù»úÖÆ¡£
8-ôÇ»ùÄñàÑßÊÄÚÇÐøͬʱ¾ßÓÐ8-ôÇ»ùÄñàÑßÊÌÇ»ùø»îÐÔ¼°ÏÙàÑßʺËËáÄÚÇÐø»îÐÔ,¸Ãø·ÖÁ½²½ÐÞ¸´DNAÖÐ82ôÇ»ùÄñàÑßÊ,ÏȽ«82ôÇ»ùÄñàÑßʵ±³É×ÔÓɼî»ùÒÆÈ¥,È»ºóÔÚÏÙàÑßÊλµãÇпªÁ×Ëá¶þËá¼üµÄ3cºÍ5c¶Ë¡£
×î½ü·¢Ïִ󳦰£Ï£¾úµÄ8-ôÇ»ùÄñàÑßÊÄÚÇÐø(ÌÇ»ùø)ÄÜÊÜÑõÕÅÁ¦Ôö¸ßµÄÓÕµ¼,¸ÃøµÄÊÊÓ¦ÐÔ·´Ó¦Ê¹ÆäÔÚÑõ»¯´Ì¼¤ÏÂÄÜ·¢»Ó¸üÓÐЧµÄ¶Ô¿¹DNAÑõ»¯ËðÉ˵Ä×÷Óá£ÖÁ½ñÉÐδ¼ûÓв¸ÈéÀà×éÖ¯82ôÇ»ùÄñàÑßÊÌÇ»ùøÓÕµ¼µÄÑо¿¡£Òò´Ë,ÎÒÃdz¢ÊÔÔÚ´óÊó¾KBrO3´¦Àíºó,Æä¸ÎºÍÉöÖÐ8-ôÇ»ùÄñàÑßÊÌÇ»ùøµÄ»îÐԸı䡣KBrO3ÊÇÒ»ÖÖÑ¡ÔñÐÔ×÷ÓÃÓÚÉöÔàµÄÑõ»¯ÐÔÖ°©Îï¡£ÔÚ±¾Ñо¿ÖÐ,½ö·¢ÏÖÉöÔà8-ôÇ»ùÄñàÑßÊÌÇ»ùøµÄ»îÐÔ±»Ñõ»¯ÓÕµ¼,¶ø¸ÎÖÐδ±»ÓÕµ¼¡£ÉöÔàÖлîÐÔÔö¸ß³ÊÏÖ¼ÁÁ¿ºÍʱ¼äÒÀÀµÐÔ¡£
1 ²ÄÁϺͷ½·¨
1.1 ¹ÑÍÑÑõºËÜÕËá×÷Ϊµ×Îï
ÓÃÓÚ82ôÇ»ùÄñàÑßÊÌÇ»ùøµÄ¹ÑÍÑÑõºËÜÕËáµÄºÏ³É°´ÕÕKuchinoµÈÃèÊöµÄ·½·¨(1987Äê)¡£
1.2 ÒÔ[14C]82ôÇ»ùÄñàÑßÊ×÷ΪÄÚ±êÎï
82ôÇ»ùÄñàÑßʶ¨Á¿µÄÄÚ±êÎï[14C]82ôÇ»ùÄñàÑßÊÓÃ[14C]ÄñàÑßÊÖÆ±¸,°´ÕÕDeganµÈÃèÊöµÄ³ÌÐò(1991Äê)¡£
1.3 ÒÔKBrO3×÷ÓÃÓÚ¶¯Îï
0.9%KBrO3ÑÎˮͨ¹ý¸¹Ä¤ÄÚ×¢ÉäÐÛÐÔFisher´óÊó,´óÊóÌåÖØÔ¼120g¡£¸øÒ©Ç°´óÊó½ûʳһҹ,Ϊ¹Û²ìKBrO3×÷ÓõÄʱ¼äЧӦ,²ÉÓÃ80mgPkg¼ÁÁ¿;°´24hʱ¼ä¼ä¸ôɱËÀ´óÊó¡£Îª¹Û²ìKBrO3×÷ÓõļÁÁ¿Ð§Ó¦,°´²»Í¬¼ÁÁ¿,×î¸ßÖÁ160mgPkg¸øÒ©,¸øÒ©ºó9hɱËÀ,·ÖÀëÆäÉöºÍ¸ÎÀ´ÖƱ¸×éÖ¯³éÌáÎï¡£
1.4 ×éÖ¯ÌáÈ¡ÎïÖÆ±¸
È¡³ö´óÊóµÄÉöºÍ¸ÎÓÃ0.9%ÀäÑÎË®³åÈ¥²ÐѪ,Éö¡¢¸ÎÓÃÒºµªÀäÈ´Öü´æÓÚ-70e±¸ÓÃ,ÓÃ2±¶Ìå»ýµÄÔȽ¬»º³åÒºÑÐÄ¥ºÍÔȽ¬Àä¶³Æ÷¹Ù,Ðü¸¡µÄÔȽ¬ÓÃ1.5%µÄÁ´Ã¹ËØ»ìºÏ,ÒÔ³ýÈ¥ºËËá,ÀëÐĺóÉÏÇåҺ͸Îö,ÓÃ×÷82ôÇ»ùÄñàÑßÊÌÇ»ùø·ÖÎöµÄ×éÖ¯ÌáÈ¡Îï¡£ÉÏÊö²½ÖèÔÚ4eÒÔϲÙ×÷¡£
1.5 ø·ÖÎö
½«4pmolË«Á´DNAµ×Îïͬ5mgÉÏÊöÉöºÍ¸ÎµÄÌáÈ¡ÎïÔÚ30eÏ·õ»¯2h,1ml·´Ó¦»ìºÏÎï°üÀ¨50mmolPLTris2HCl¡¢50mmolPLKCl¼°1mmolPLEDTA,pHֵΪ7.5,ͨ¹ý90e¼ÓÈÈ3minÀ´ÖÕÖ¹·´Ó¦,°´6000rPminÀëÐÄ10min,È¡900LlÉÏÇåÒº¼Ó100LlÔ¼400´ÎPmin14C8-ôÇ»ùÄñàÑßÊÄÚ±êÒº,¸Ã»ìºÏÎï¼ÓÈë¾8-ôÇ»ùÄñàÑßʵ¥¿Ë¡¿¹ÌåÖÆ±¸µÄÃâÒßÇ׺ÍÖù¡£¾´¿»¯µÄ82ôÇ»ùÄñàÑßÊÈÜÓÚ50LlË®,×¢Èë5Lm,416mmx25cmHPLCÖù,½øÐиßЧҺÏàÉ«Æ×¡¢µç»¯Ñ§¼ì²â·ÖÎö,²âÁ¿µç»¯Ñ§¼ì²âÆ÷ÉÏÏÔʾµÄ82ôÇ»ùÄñàÑßÊ·å¸ß¼°8-ôÇ»ùÄñàÑßÊÏ´ÌáÒºµÄ·ÅÉä»îÐÔ,·å¸ßÓÃÓÚ82ôÇ»ùÄñàÑßʵ͍Á¿,ÊÇ·´Ó¦½éÖʺͼÓÈë14C282ôÇ»ùÄñàÑßʵÄ×ܺ͡£´Ó×ÜÁ¿ÖмõÈ¥ÄÚ±êÎï¼´µÃµ½Ô·´Ó¦½éÖÊÖÐ8-ôÇ»ùÄñàÑßʵÄÁ¿¡£Ëù¼Ó14C282ôÇ»ùÄñàÑßÊ¿Éͨ¹ýУ׼ÇúÏß±È½ÏÆä·å¸ßÓë·ÅÉä»îÐÔÀ´¶¨Á¿¡£Ï´ÌáÒºµÄ·ÅÉä»îÐÔ¿ÉÓÃÀ´¶¨Á¿ÔÚÃâÒßÇ׺ÍÖù´¿»¯¹ý³ÌÖÐ8-ôÇ»ùÄñàÑßʵÄËðʧÁ¿¡£¼ÓÈë1ml·´Ó¦½éÖÊÖеÄ8-ôÇ»ùÄñàÑßʵÄÁ¿¿ÉÀûÓÃËðʧÂʺͷ´Ó¦½éÖÊÖÐ8-ôÇ»ùÄñàÑßʵÄÔʼÁ¿À´²â¶¨,ø»îÐԿɱí´ïΪÔÚÉÏÊö·´Ó¦Ìõ¼þÏÂDNAµ×ÎïÖÐÊͷųöÀ´µÄ8-ôÇ»ùÄñàÑßʵĺ¬Á¿,Êý¾Ý¿É±í´ïΪ6´ÎʵÑéµÄ¾ùÖµ±±ê×¼Îó²î¡£Í³¼Æ·ÖÎöÓÃt¼ìÑé¡£
2 ½á¹û
KBrO3¶Ô82ôÇ»ùÄñàÑßÊÌÇ»ùø»îÐÔµÄÓ°ÏìЧӦ¿Éͨ¹ýÉöÓë¸ÎÖк¬Á¿µÄʱ¼ä¼°¼ÁÁ¿Ð§Ó¦À´±í´ï¡£Îª±È½ÏÆð¼û,ÉöÔ౻ѡ×÷°ÐÆ÷¹Ù,¸ÎÔà×÷¿ØÖƶԱȡ£Í¼1ÏÔʾ¸¹Ä¤ÄÚ¸øÓè80mgPkg¼ÁÁ¿KBrO3ºó,Á½ÖÖÆ÷¹ÙÖÐ82ôÇ»ùÄñàÑßʺ¬Á¿µÄʱ¼äЧӦ¹ØÏµ,ÔÚÉöÔà,·¢ÏÖÆä»îÐÔÔÚ3h[(0.73±0.14)pmol]ʱÏÔÖøÉý¸ß,Ïà±ÈÖ®ÏÂ,ÔÚ0h»îÐÔÖ»ÓÐ(0.20±0.06)pmol,¶øÔÚ6hʱ,Æä»îÐÔ´ïµ½¸ß´óÖµ(1.25±0.14)pmol,¸ÃÖµÊÇ0ʱµÄ6±¶¡£È»ºó,»îÐÔ¿ªÊ¼Ï½µ²¢ÔÚ12h»Øµ½0hˮƽ;×÷Ϊ¶Ô±È,¸ÎÖлîÐÔÔÚÏàͬʱ¼ä¶Î²¢ÎÞÏÔÖø±ä»¯¡£Í¼2ÏÔʾÆä»îÐÔÓëKBrO3¼ÁÁ¿µÄ¹ØÏµ,²»¼Ó´¦Àíʱ,»îÐÔÖ»ÓÐ(0.20±0.06)pmol,¶øÔÚ20¡¢40¡¢80¼°160mgPkgKBrO3¸¹Ä¤Ï¸øÓèʱ,Æä»îÐÔ·Ö±ðÊÇ(0.33±0.09)¡¢(0.53±0.10)¡¢(0.75±0.13)¼°(1.30±0.08)pmol,ÔÚ40mgPkgÒÔÉÏʱ»îÐÔÏÔÖøÔö¸ß,ÇÒÏÔʾ¼ÁÁ¿·´Ó¦¹ØÏµ,¶ø¸ÎÖлîÐÔÔÚÏàͬµÄ¼ÁÁ¿·¶Î§ÄÚ²¢ÎÞÏÔÖø±ä»¯¡£


