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提問時間 2026-04-16 10:00:05
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您的樣品是否含有<20 kDa的目標蛋白質?請下載如何使用SDS-PAGE檢測合成肽的方案,其中包括考馬斯藍染色,銀染和電印跡的有效方法。
Tricine-SDS-PAGE常用於分離1-100 kDa質量範圍內的蛋白質。它是用於分辨小於30kDa蛋白質的首選電泳係統。
通過SDS-PAGE看到小肽確實是非常困難的。 Tris-tricine凝膠會給你更好的分辨率。如果您隻想檢測肽,質譜仍然是確認肽身份的最佳方法。
小(xiao)肽(tai)與(yu)較(jiao)大(da)的(de)蛋(dan)白(bai)質(zhi)結(jie)合(he)較(jiao)少(shao)的(de)考(kao)馬(ma)斯(si)亮(liang)藍(lan)色(se)。因(yin)此(ci),較(jiao)小(xiao)的(de)肽(tai)通(tong)過(guo)考(kao)馬(ma)斯(si)染(ran)色(se)或(huo)銀(yin)染(ran)更(geng)難(nan)以(yi)檢(jian)測(ce)。如(ru)果(guo)你(ni)真(zhen)的(de)想(xiang)在(zai)凝(ning)膠(jiao)上(shang)看(kan)到(dao)你(ni)的(de)肽(tai),你(ni)可(ke)以(yi)嚐(chang)試(shi)加(jia)載(zai)更(geng)多(duo)的(de)樣(yang)品(pin)。除(chu)非(fei)您(nin)認(ren)為(wei)您(nin)的(de)肽(tai)從(cong)凝(ning)膠(jiao)中(zhong)遷(qian)移(yi)出(chu)來(lai),否(fou)則(ze)更(geng)換(huan)凝(ning)膠(jiao)百(bai)分(fen)比(bi)不(bu)會(hui)有(you)多(duo)大(da)幫(bang)助(zhu)。您(nin)可(ke)以(yi)增(zeng)加(jia)常(chang)規(gui)17%凝膠中交聯劑的百分比。此外,與常規8.8相比,將分辨凝膠的pH值提高到9.5。另外,尿素(4-8M)的添加有助於削尖帶。
ruguoninyaoshiyongxifang,zheshiyizhonggenglingmindejiancefangfa,qingshiyongxifang,erbushiningjiaoranse。raner,taikeyijiandandichuanguomo。ruguonizhongfushiyan,shizhebaliangpianmopianhegengduandeshijianzhuanyi(在200毫安時少於1小時)。 0.2um的毛孔就足夠了。你可以得到更小的毛孔,但這不應該是必要的。您可能需要按設備的建議電流密度(mA / cm2)進行半幹轉印15-20分鍾。短的15分鍾轉移時間適用於大多數小肽。
如果您可以提前計劃並合成用生物素標記的對照小肽,您可以監測轉移過程及其與鏈黴親和素綴合的HRP結合膜的能力。