LC-MS/MS的基質效應消除這樣辦!

發布日期:2021-11-01
核心提示:高效液相色譜串聯質譜技術(LC-MS/MS)以其靈敏度高、特異性強、分析速度快等特點,在獸殘、農殘檢測領域廣泛應用。但是,對於樣品
高效液相色譜—串聯質譜技術(LC-MS/MS)以其靈敏度高、特異性強、分析速度快等特點,在獸殘、農nong殘can檢jian測ce領ling域yu廣guang泛fan應ying用yong。但dan是shi,對dui於yu樣yang品pin基ji質zhi複fu雜za,檢jian測ce中zhong存cun在zai的de基ji質zhi效xiao應ying,成cheng為wei影ying響xiang分fen析xi結jie果guo的de準zhun確que度du與yu精jing密mi度du的de關guan鍵jian因yin素su,所suo以yi基ji質zhi效xiao應ying問wen題ti應ying受shou到dao分fen析xi工gong作zuo者zhe的de重zhong視shi。化hua學xue分fen析xi中zhong,基ji質zhi指zhi的de是shi樣yang品pin中zhong被bei分fen析xi物wu以yi外wai的de組zu分fen。基ji質zhi常chang常chang對dui分fen析xi物wu的de分fen析xi過guo程cheng有you顯xian著zhu的de幹gan擾rao,並bing影ying響xiang分fen析xi結jie果guo的de準zhun確que性xing。例li如ru,溶rong液ye的de離li子zi強qiang度du會hui對dui分fen析xi物wu活huo度du係xi數shu有you影ying響xiang,這zhe些xie影ying響xiang和he幹gan擾rao被bei稱cheng為wei基ji質zhi效xiao應ying(matrix effect)。LC-MS/MS分析中非目標分析物作為樣品中的共流出物,對目標分析物的離子化會產生影響和幹擾,這些影響和幹擾就是基質效應。在LC-MS/MS中zhong,基ji質zhi效xiao應ying是shi由you於yu非fei目mu標biao分fen析xi物wu與yu目mu標biao物wu共gong同tong流liu出chu噴pen霧wu針zhen,對dui電dian荷he產chan生sheng競jing爭zheng,它ta們men將jiang產chan生sheng的de霧wu滴di牢lao牢lao吸xi在zai一yi起qi,阻zu止zhi其qi分fen裂lie成cheng更geng小xiao的de微wei滴di,改gai變bian了le帶dai電dian霧wu滴di的de表biao麵mian張zhang力li,從cong而er導dao致zhi目mu標biao物wu的de離li子zi化hua效xiao率lv降jiang低di或huo增zeng強qiang,引yin起qi響xiang應ying降jiang低di或huo增zeng高gao,便bian產chan生sheng了le所suo謂wei的de基ji質zhi抑yi製zhi效xiao應ying或huo基ji質zhi增zeng強qiang效xiao應ying。基質效應主要來源於生物樣品的內源性組分,經前處理後仍存在於提取液中。包括離子顆粒物成分(電解質、鹽類)、強極性化合物(酚類、色素)和各種有機化合物(糖類、胺類、尿素、脂類、肽類及其分析目標物的同類物及其代謝物)。其中磷脂是最主要的內源性組分, 其對電噴霧電離(ESI)和大氣壓化學電離 (APCI)均會產生離子抑製作用。含有P=O、-O-CO-NH-、OH、R-NH-、-N=、-NH-CO-NH- 等基團的農藥通常表現出較強的基質效應。由樣品處理過程引入的外源性組分,同樣會產生基質效應。主要包括無機離子、緩衝溶液、有機酸、離子對試劑、增塑劑、表麵活性劑殘留、固相萃取(SPE)小柱材料及色譜柱固定相流失物等。在實際工作中,可以將空白基質匹配標準溶液與純溶劑配置標準溶液所製得的標準曲線的斜率進行比較,來評價基質效應的強弱。其中,Sm:空白基質匹配標準溶液製得的工作曲線的斜率;若 ME>0,表現為基質增強效應,若 ME<0,表現為基質抑製效應。當0≤|ME|≤20%時,說明基質對信號幹擾較低,可忽略不計;當20%<|ME|<50%時,表現為中等強度的基質幹擾,而當|ME|≥50%,則為強基質幹擾。1、樣品前處理
改進前處理方法、純化樣品、盡可能地減少終提取液中的基質成分是有效、徹底地消除基質效應的方法。生物樣品的前處理方法很多,研究普遍認為利用蛋白質沉澱法或稀釋法處理的樣品,其基質效應明顯高於SPE或LLE方法。盡管樣品前處理過程繁瑣,但樣品純化仍是最佳的基質效應消除方法。
2、同位素內標
同位素內標不但可抵消質譜離子化時的基質效應,還可消除樣品前處理過程中的差異。但dan同tong位wei素su內nei標biao購gou置zhi困kun難nan,且qie在zai多duo個ge分fen析xi物wu同tong時shi檢jian測ce時shi,由you於yu存cun在zai極ji性xing差cha異yi,即ji使shi是shi同tong類lei物wu的de同tong位wei素su內nei標biao也ye很hen難nan抵di消xiao基ji質zhi效xiao應ying,造zao成cheng定ding量liang結jie果guo偏pian差cha。采用柱後法確定基質效應的出現時間,即可調整色譜條件,使分析物避免在此段時間內出峰。此方法在高通量分析時無法使用,但可用快速梯度的方法將分析物與溶劑分離。
4、質譜分析
基質效應隨離子源、離子化模式和儀器的不同而不同。修正質譜分析是一種比較易行的方法,無需改變樣品的前處理和色譜條件。雖然APCI同樣存在基質效應,但是對於特定的化合物,特別是對於蛋白質沉澱法處理的樣品,若采用ESI有明顯的基質效應,但可能該基質並不影響APCI的離子化。另外,APPI因其離子化機製不同於APCI和ESI,也不會產生相似的基質效應。LC-MS/MS分析時應采用相同基質的標準物質添加以校正,以使結果更準確。
編輯:songjiajie2010